种植体周围炎对颌骨成骨细胞生物学功能的影响(2)
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参见附件。
1.4 MTT法检测成骨细胞的增殖能力
取对数生长期第3代细胞，经胰蛋白酶消化后离心加入DMEM(10%胎牛血清)终止成细胞混悬液，调整密度为2×104个·mL-1接种于96孔板，每孔0.2 mL。贴壁后隔天换液，连续培养8 d。每隔24 h取3孔，每孔加入20 μL 5 g·L-1 MTT溶液，37 ℃、5%
CO2孵箱中孵育4 h，加入二甲基亚砜200 μL。采用酶联免疫检测仪490 nm波长下检测吸光度值，实验重复3次。
1.6 Western blot法检测成骨细胞相关蛋白OCN的表达
取第3代细胞进行接种，培养7 d后，将细胞用0.01 mol·L-1 PBS反复冲洗3遍，裂解细胞提取蛋白。取等量蛋白经8%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳后，将凝胶转移到聚偏二氟乙烯膜上，脱脂奶粉封闭过夜。加入鼠抗人OCN(Abcam公司，英国)(1︰1 000稀释)和β-actin(1︰2 000稀释)，37 ℃孵育2 h，洗膜后，经辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG2a(Abcam公司，英国)(1︰4 000稀释)孵育50 min，化学发光法显示抗原抗体复合物，X线片显影并定影，所有杂交信号经成像分析仪系统测定条带密度进行定量分析，以目的蛋白灰度值与内参β-actin的比值表示蛋白的表达水平。
1.7 统计学分析
采用SPSS 13.0软件进行统计分析，独立样本t检验进行两组间比较，P<0.05为有统计学差异。
2 结果
2.1 成骨细胞的分离培养及纯化
种植体周围炎来源的成骨细胞与正常组织来源的成骨细胞在培养过程中状态基本相同，10～14 d时从组织块中爬出 ......
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