失神经支配对牙周组织中P物质及破骨细胞的影响(2)
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1.1 材料
8周龄雄性Wistar大鼠30只(山东大学动物实验中心提供)；P物质一抗(北京博奥森生物技术有限公司)，SP-9001抗原修复液、DAB显色液(以上试剂均由北京中杉金桥生物技术有限公司提供)；抗酒石酸酸性磷酸酶(tratrate resistant acid phospha-tase，TRAP)染色试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)；NP-P型生物组织摊片烤片机(济南科华医疗器械厂)，LEICA RM2135切片机(LEICA公司，德国)，生物学显微镜及成像系统(OLYMPUS公司，日本)。
1.2 实验方法
实验动物模型建立及取材：30只大鼠随机分为6组，每组5只，分别为正常组(0 d)和术后第3、7、14、21、28天组。腹腔内注射10%水合氯醛(剂量4 mL·kg-1)对大鼠进行麻醉，沿大鼠左侧下颌角下缘下方约5 mm做长约1.5 cm的手术切口，钝性分离抵触骨壁后向下内侧沿骨壁分离约1 cm即可抵达下颌孔，可见白色的下牙槽神经自此孔穿入，自下颌孔处剪除约5 mm的下牙槽神经，以防止神经的自行吻合；分层对位缝合手术切口；术后连续3 d注射抗生素。分别于手术当天，术后第3、7、14、21、28天对各组大鼠取材，采取心脏内灌注的方法进行循环内固定，取左侧下颌骨放入4%多聚甲醛溶液中固定6 h，10%乙二胺四乙酸常规脱钙，以针扎无阻力感为脱钙终止的标准。脱钙结束后梯度乙醇脱水，二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明，浸蜡，包埋。对组织块进行颊舌向连续切片，切片厚5 ?m。
免疫组织化学染色：石蜡切片脱蜡至水，PBS冲洗3次，每次3 min，3%H2O2孵育10 min，PBS冲洗3次，每次3 min ......
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