人Notch-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定(2)
 |
| 第5页 |
 |
| 第1页 |
参见附件。
涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carci-noma，SACC)是涎腺常见的恶性肿瘤，国内统计其占涎腺肿瘤的9.9%[1]，国外统计其占涎腺肿瘤的7.5%[2]。SACC的恶性程度高，主要表现为侵袭性强，局部易复发；易远处转移，以肺转移多见，转移率高达40%；有典型嗜神经性，早期即可沿神经侵袭和转移，导致面瘫、麻木、疼痛等神经受损症状，给临床治疗带来很大的困难，预后差[2]。本课题前期研究已成功构建了SACC嗜神经侵袭基因表达谱，Notch-1即为其中重要差异表达基因之一[3]。
Notch信号途径是一个进化上保守的信号转导通路，在调节细胞的分化、增殖与凋亡中起重要作用。Notch信号途径的异常调控可引起组织的发育异常，并最终导致肿瘤等多种疾病的发生[4]。研究[5]表明，Notch家族基因Notch-1、Notch-2、Notch-4与SACC的发生、发展、转移有关，但其与SACC嗜神经侵袭行为间的关系尚未见报道。本研究的目的是构建人Notch-1基因的RNA干扰(RNA interference，RNAi)慢病毒载体，并对其进行鉴定，寻找最佳RNAi慢病毒载体，为探讨Notch-1在SACC中的功能与分子机制奠定基础。
1 材料和方法
1.1 主要材料
慢病毒载体pLenOR-THM(上海英为信生物科技有限公司)，配有3个包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G。Taq DNA聚合酶、限制性内切酶BamHⅠ、EcoRⅠ、KpnⅠ(Takara公司，日本)，T4 DNA连接酶(NEB北京有限公司)，AxyPrep质粒小量制备试剂盒(Axygen公司，美国)，Nucleo-Bond Xtra Midi Plus质粒纯化试剂盒(Macherey-Nagel公司，德国)，高效感受态细胞制备试剂盒(上海生物工程有限公司)，大肠杆菌菌株DH5α、RPMI-
1640和DMEM培养基、LipofectaminTM2000、胰蛋白酶、Trizol(Invitrogen公司 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。