载银抗菌纯钛表面的制备及其抗菌性能的检测(2)
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参见附件。
经上述处理的钛片放入0.05%的APS乙醇溶液中30 min,接着将硅烷化后的钛片放入乙醇中超声振荡30 s,再用去离子水清洗,冷风干燥。最后将干燥的钛片在纳米银溶液里浸泡处理30 min后,在80 ℃下真空干燥1 h。最后将钛片用去离子水多次冲刷,将表面未黏附的纳米银颗粒去除,干燥。
1.4 钛片理化性能的检测
1.4.1 扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)分析 采用SEM观察钛片表面形貌,包括钛表面湿化学法处理后形貌,银颗粒的分布、形态和大小。
1.4.2 X射线能谱(energy dispersive X-ray spectrome-ter,EDX)分析 采用EDX对改性后钛片上各元素成分进行鉴定。
1.4.3 X射线光电子能谱(X-ray photoelectron spec-troscopy,XPS)分析 采用XPS对改性钛片各元素进行分析。用Mg的Kα射线作光源,能谱以结合能284. 8 eV为参比,真空室压力为1×10-7 Pa。
1.5 实验菌株的培养
复苏冻干菌株接种于BA琼脂平板上,在37 ℃条件下需氧培养24 h,涂片染色后形态学观察为纯培养物后,再将其接种于BA琼脂平板上需氧培养24 h,经形态学及生化实验鉴定为纯培养物后,备用。
1.6 培养基和菌液的准备
将培养平板上的细菌用接种环接种到3 mL BA液体培养基中,用加样枪吹打混匀后取2 mL菌悬液进行比浊,根据比浊后结果将剩余1 mL金黄色葡萄球菌、大肠杆菌菌液浓度调整至1×108 CFU·mL-1。将固体BA培养基加热融化后取15 mL倒入培养平皿,室温下无菌冷却,备用。
1.7 贴膜法检测抗菌性能
实验分为3组,分别为大肠杆菌实验组(纳米银改性钛片)、金黄色葡萄球菌实验组(纳米银改性钛片)、对照组(光滑钛片)。每组各10片分别置于灭菌干燥平皿中,各取15 µL菌悬液滴加于钛片表面,再用20 mm×20 mm方形盖玻片轻轻覆盖钛片表面以使菌液均匀散开,但勿溢出,然后将其放入无菌湿盒子中需氧培养24 h ......
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