MC3T3—E1细胞流体剪切力敏感信号通路的基因芯片研究(2)
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参见附件。
E1细胞加载筛选出的FSS,通过基因芯片检测差异表达基因及相关信号通路,希望进一步明确应力作用下成骨细胞参与骨改建的分子生物学机制。
1 材料和方法
1.1 实验材料
MC3T3-E1细胞株(ADCC公司,美国),胎牛血清、胰蛋白酶(Gibco公司,美国),TRIZOL试剂、聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)试剂盒、Invitrogen Superscript双链cDNA合成试剂盒(Invitrogen公司,美国),平行板流室加力装置(四川大学华西口腔医学院FSS课题组提供),Nim-blegen杂交系统4(Roche NimbleGen公司,美国),Molecular Devices GenePix pro V6.0(Axon Instru-ments公司,美国),NimbleGen单色DNA标记试剂盒、Mus musculus 12×135k v2 array小鼠全基因表达谱芯片(Nimblegen公司,美国)。
1.2 细胞培养
用含10%胎牛血清的α-MEM培养MC3T3-E1细胞,培养基包含1×105 U·L-1青霉素及100 mg·L-1链霉素,置5%CO2、37 ℃培养箱中培养,3 d换液1次,待细胞生长至80%~90%时用于后续实验。
1.3 加载FSS
实验分为加力组和对照组,细胞按每孔2×105个接种于放置在六孔板中的盖玻片上,细胞培养箱静置培养至细胞完全贴壁 ......
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