人工合成抗菌肽对口腔细菌抗菌性能的初步研究(2)
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参见附件。
1.5.5 十肽对变异链球菌时间-杀菌曲线的测定 实验分为阳性对照组(含0.1%氯己定的TPY液体培养基)、阴性对照组(TPY液体培养基)、实验组(含MBC浓度的十肽的TPY液体培养基)。将200 μL的变异链球菌菌悬液分别加入实验组、阳性对照组及阴性对照组中，菌悬液与TPY液体培养基的比例为
1︰9，变异链球菌的终浓度为1×106 CFU·mL-1，37 ℃兼性厌氧培养，分别培养0、10、20、30 min，及1、2、4、8、24 h提取菌液。PBS缓冲液梯度稀释(0、10、100、1 000倍)后取50 μL菌悬液接种于TPY固体培养基上，培养24～48 h后计数菌落数。以时间为横坐标，菌落形成单位数(CFU·mL-1)的对数值(log)为纵坐标，绘制时间-杀菌曲线。活菌计数减少99.9%即差异>3 log CFU·mL-1者视为有杀菌作用，活菌计数下降1～3 log CFU·mL-1者视为有抑菌作用[2，4]。实验重复3次，取平均值。
1.6 统计学分析
采用SPSS 13.0软件对抑菌环直径行配对t检验分析。
2 结果
2.1 十肽的合成分析结果
质谱分析十肽相对分子质量为1 249.958，与理论相对分子质量的1 249.7基本一致，误差小于2‰。高效液相色谱分析十肽纯度为98.22%。
3 讨论
抗菌肽是一类对抗外界病原体感染的肽类活性物质，它们多为12～50个氨基酸组成的短肽[5]。抗菌肽最重要、最引人关注的生物学活性是其高效广谱的抗微生物活性，其抗菌作用具有以下特点：抗菌谱广，对革兰阳性、阴性菌都表现出较强的抗菌作用；杀菌快速；不易产生耐药性，已经在临床上得到广泛应用。抗菌肽的杀菌方式多种多样，主要作用机制包括：细胞膜攻击作用、线粒体攻击作用、对染色体的破坏作用、干扰细菌代谢或直接作用于胞浆成分、促进调亡相关蛋白及配体的表达、影响DNA的复制和转录[6-7] ......
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