占育华 崔涵 刘济远 周伟 阙林 唐休发

    口腔疾病研究国家重点实验室 华西口腔医院头颈肿瘤外科(四川大学)，成都 610041

    口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是头颈部最为常见的恶性肿瘤，其发病率有逐渐增加的趋势。研究表明糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase 3β，GSK-3β)能磷酸化多种底物，负性调节多条信号通路。多种恶性肿瘤的发生与GSK-3β均密切相关，如喉癌、食道癌、恶性黑色素瘤等[1-2]。核因子κB(nuclear factor κB，NF-κB)作为抗细胞凋亡基因B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma-2，Bcl-2)的上游调控基因[3]，是具有多向性调节作用的转录因子。NF-κB的异常活化在肿瘤发生发展及侵袭转移中有着十分重要的作用[4-5]，但目前关于NF-κB/Bcl-2信号通路与GSK-3β在OSCC发生发展中的作用及这几种因子之间相互关系的研究较少见。本研究选用免疫组织化学方法检测不同组织学分化程度的鳞癌组织和OSCC癌旁组织中GSK-3β、NFκB及Bcl-2的表达情况，初步探讨GSK-3β、NF-κB及Bcl-2与OSCC临床病理参数的关系，以及这几种蛋白在OSCC中表达的相互关系，研究其作为OSCC的标志物或者预测因子的可能性，为临床上对OSCC进行早期诊断和治疗提供参考。

    1 材料和方法

    1.1 标本来源

    收集2007—2011年四川大学华西口腔医院头颈肿瘤外科手术切除并经病理确诊为口腔鳞状细胞癌的病例55例，同时伴发其他口腔疾病者不纳入本实验的范围，所有纳入病例术前均未行放化疗。55例患者中，男39例，女16例；根据组织学分化程度分类，鳞状细胞癌一级25例，二级18例，三级12例；临床分期Ⅰ期14例，Ⅱ期12例，Ⅲ期15例，Ⅳ期14例。在55例患者中随机选取10例，取癌旁组织(肿瘤边缘约1 cm)作为对照组。所有标本均在离体后经甲醛固定，取材，逐级脱水后采用石蜡包埋。

    1.2 主要试剂

    兔抗人p-GSK-3β(Ser9)多克隆抗体(北京博奥森生物科技有限公司)，兔抗人Bcl-2多克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司)，兔抗人NF-κB多克隆抗体、免疫组织化学羊抗兔试剂盒(SP-9001)及浓缩型DAB试剂盒(ZL1-9031)(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

    1.3 实验方法

    1.3.1 标本切片 将所收集的病理标本石蜡块常规切片 ......