李书琴 杨珊 任嫒姝 戴红卫

    重庆医科大学附属口腔医院正畸科，口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室，重庆 401147

    牙齿移动过程中，牙根受力会发生一定程度的吸收及修复。成牙骨质细胞是力学敏感细胞，与牙根部牙骨质吸收后的修复密切相关。Wnt/β-catenin是与力学刺激和成骨效应都有相关的信号通路，力学刺激能够激活成骨细胞内的Wnt/β-catenin信号通路，促进成骨细胞Runx2的表达。目前力学刺激下Wnt/β-catenin信号通路对成牙骨质细胞Runx2表达的调控作用尚未可知。本研究通过张应力刺激以及特异性阻断剂的干预，以Runx2为切入点，研究张应力刺激对成牙骨质样细胞中Wnt/β-catenin信号通路的激活效应以及该通路对Runx2的调控作用。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料和设备

    成牙骨质细胞株OCCM30(四川大学华西口腔医院白丁教授惠赠)。BioFlex加力板(Flexcellint公司，美国)。阻断剂Dikkopf-1(DKK1)(Sino biological公司，美国，目录号：10170-H08H)。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-PCR)试剂盒(TaKaRa公司，日本)；FX4000T加载装置(Flexcellint公司，美国)，倒置相差显微镜及照相系统(尼康公司，日本)，FTC2000型RT-PCR基因扩增仪、FTC2000型聚合酶链反应合成仪(上海枫岭生物技术有限公司)，高速低温离心机(Heraeus公司，德国)，凝胶成像及图像分析系统(Bio-Rad公司，美国)。本实验目的基因Runx2以及内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-phosphate dehydrogenase，GAPDH)的引物序列由上海生工生物工程技术服务有限公司设计合成，其序列见表1。

    表1 引物序列Tab 1 Primer sequences

    1.2 研究方法

    1.2.1 OCCM30的培养 将同一批传代的细胞按每毫升1×105个细胞的密度接种于BioFlex加力板上，每板加入培养液(90%体积分数DMΕM ......