王敏永 刘鹤 李盛林 秦满

    1.北京大学口腔医学院·口腔医院儿童口腔科；2.口腔颌面外科研究室，北京 100081

    牙髓治疗的最理想的方法是活髓保存，盖髓剂可以通过某种机制消除牙髓早期炎症并形成封闭使之保存活力[1-2]。盖髓剂性能的关键在于其生物相容性，以及对牙髓细胞增殖和分化能力的影响。作为经典盖髓剂——氢氧化钙制剂在恒牙盖髓治疗上取得了很好效果，但是在乳牙盖髓治疗中效果差强人意[3]。三氧化矿物凝聚体(mineral trioxide aggregate，MTA)与氢氧化钙相似，可以促进牙髓细胞增殖及分化，促进形成修复性牙本质[4-6]。由于其良好的生物相容性和封闭性，近些年被广泛应用于盖髓术，并取得了良好的临床效果。特别是在乳牙盖髓治疗方面，MTA可以取得更好的临床效果[7-8]。但MTA对乳、恒牙牙髓细胞作用差别的机制尚不清楚。

    本研究通过对比MTA和氢氧化钙对乳、恒牙牙髓细胞增殖以及与成牙本质相关因子碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein，DSPP)和破牙本质相关因子骨保护因子(osteoprotegerin，OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand，RANKL)等基因表达的影响，探讨其对乳、恒牙牙髓作用的机制，为MTA的临床应用提供依据。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    α-MΕM培养基、15%胎牛血清(Gibco公司，美国)，2 mmol·L-1谷氨酰胺、100 μmol·L-1左旋抗坏血酸磷酸盐(Sigma公司，美国)，100 U·mL-1青霉素、100 μg·mL-1链霉素(华北制药集团)。

    ΕLx808酶标仪(BioTek公司，美国)，RNA酶抑制剂(Biolab公司，美国)，逆转录酶M-MLV(Invitrogen公司，美国)，7500实时荧光定量聚合酶链反应(real time polymerase chain reaction，real time PCR)仪、SYBR GRΕΕN PCR MASTΕR MIX(ABI公司，美国)。

    1.2 乳、恒牙牙髓细胞培养

    经患者及家属知情同意，临床收集健康、无明显根吸收的滞留乳牙及因正畸拔除的前磨牙，即刻在无菌条件下取出牙髓，弃用根尖2 mm，剪碎后平铺于25 cm2培养瓶，使用α-MΕM培养基，加入15%胎牛血清、2 mmol·L-1谷氨酰胺、100 μmol·L-1左旋抗坏血酸磷酸盐、100 U·mL-1青霉素、100 μg·mL-1链霉素 ......