刘敏 闫嘉惟 刘娅玲 郝玉庆

    1.滨州医学院附属医院口腔内科，滨州 256603；2.口腔疾病研究国家重点实验室 华西口腔医院(四川大学)，成都 610041；3.成都市第五人民医院口腔科，成都 610041

    自溶酶是革兰阳性菌产生的一种细胞壁肽聚糖水解酶。目前，细菌自溶酶的作用与调控机制已成为致病性生物膜研究的热点之一，但对于有益菌自溶酶的研究甚少，而有益菌自溶酶对细菌生存竞争与生物膜生态平衡可能具有重要作用[1]。

    口腔有益菌格氏链球菌(Streptococcus gordonii，S.gordonii)是菌斑生物膜最早期的定植菌之一，在健康菌斑中占有相当高的比例，对维护菌斑的生态平衡具有重要意义[2]。S.gordoniisg2013蛋白是形成正常细胞壁结构、生物膜及细菌自溶酶的关键蛋白。该蛋白能够水解S.gordonii细胞壁的肽聚糖，具有自溶酶功能，命名为AtlS[3]。研究[3]发现，AtlS对细菌生存竞争及拮抗致龋菌有重要作用。基于AtlS在S.gordonii生存竞争及拮抗致龋菌具有重要作用以及氧和pH值对细菌生长的影响，本实验运用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR)的方法研究S.gordonii的atlS基因在不同生长期及pH值的表达差异，进而分析调控S.gordoniiatlS表达的因素。

    1 材料和方法

    1.1 实验菌株和培养基

    S.gordoniiATCC 35105购于美国标准品收藏中心。脑心浸液(brian heart infusion，BHI)培养基(Oxoid公司，英国)；两种TY(tryptone yeast)培养基，一种pH=7.0，由50 mmol·L-1磷酸钾缓冲液配制；另一种pH=5.5，由6 mol·L-1盐酸配制。

    1.2 主要仪器及设备

    YJ-875型超净工作台(苏州净化设备厂)，7300型FQ-PCR仪(Applied Biosystems公司，美国)，Hermle Z323K型低温离心机(Hermle Labartechnik公司，德国)，SPΕCTRONIC 200型分光光度计(Thermo Fisher公司，美国)，pH计(Mettler Toledo公司，瑞士)，Bio-Rad电泳仪(Bio-Rad公司，美国)。

    1.3 实验方法

    1.3.1 实验菌株的培养 1)BHI培养基中实验菌株的培养 ......