崔博淼 余宇 袁雯雯 周闻捷 周学东 张平

    口腔疾病研究国家重点实验室 华西口腔医院(四川大学)，成都 610041

    唾液在维护口腔健康和微生态平衡的同时，也存在很多在疾病发生中起重要作用的成分。唾液作为人体自身分泌的一种生理物质，组成成分复杂多样，可以在唾液中稳定存在的蛋白质有90多种[1]。目前已经分离出40余种唾液蛋白，其中白蛋白和球蛋白是较重要的唾液功能蛋白，也是体液免疫的重要成分[2]。已知有多种口腔疾病都会在唾液中得以体现，如甲状腺炎、糖尿病、牙周炎、慢性肾炎等疾病都可以影响唾液蛋白成分[3-5]。

    近几年，人们对唾液有了新的认识，并试图通过检测唾液成分作为诊断疾病的工具，开发一种无创伤疾病检测的新方法。唾液成分及量的改变与口腔疾病、机体代谢功能改变密切相关。本实验对37名健康受试者及24名发生牙周炎患者全唾液中的总蛋白和部分唾液蛋白组分进行定量分析，确定其参考范围，以便为口腔疾病的诊断治疗提供参考。

    1 材料和方法

    1.1 研究对象

    本实验收集37名健康受试者以及24名慢性牙周炎患者的全唾液。61名研究对象为23～36岁，平均(28.57±0.69)岁。所有对象均无全身系统性疾病。健康受试者要求无口腔疾病，无饮酒吸烟史。

    1.2 样品收集和保存

    分别采集37名健康受试者1 d内8:00、9:30、11:30、13:00、16:30、21:00左右的全唾液以及24名牙周炎患者早晨的非刺激全唾液。在收集唾液之前，要求研究对象用清水漱口，5 min后开始收集唾液。

    唾液样品收集完毕后，在10 000 r·min-1、4 ℃条件下离心10 min，所得上清液分装入两个EP管中，一管300 μL，另一管100 μL。300 μL用于白蛋白检测，100 μL用于总蛋白检测，并加入500 μL PBS液稀释6倍。标记后分别将上清液-75 ℃冷冻保存[6]。

    1.3 实验方法

    1.3.1 仪器与试剂 BCA蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)，Varioskan Flash(Thermo公司，美国)。GF-D800型半自动生化分析仪(山东高密彩虹分析仪器有限公司)，白蛋白测试盒(长春汇力生物技术有限公司)。

    1.3.2 检测方法 采用BCA法在酶标仪上测定总蛋白的质量浓度。白蛋白的质量浓度使用GF-D800型半自动生化分析仪和白蛋白测试盒采用溴甲酚绿法进行测定 ......