于倩 林静 祖力卡尔江·阿合买提 赵今

    新疆医科大学第一附属医院牙体牙髓病科·新疆维吾尔自治区口腔医学研究所，乌鲁木齐 830054

    龋病是被世界卫生组织列为人类重点防治的非传染性疾病。牙菌斑生物膜与龋病的发生有密切的关系，它是存在于牙面的一个细菌生态环境，细菌在其中生长、发育、衰亡又不断新生，并进行着复杂的物质代谢，在一定条件下，细菌及其代谢产物会对牙齿产生破坏[1]。单纯使用机械的方法并不能完全清除覆盖于牙面的所有菌斑，因此使用药物控制菌斑是必不可少的补充。蜂胶是一种天然的抗菌剂，安全无毒副作用，由于地域、季节和植物的不同，蜂胶的成分具有多样性和差异性[2-3]。本研究采用新疆伊犁黑蜂蜂胶，通过其对口腔常见致龋菌单菌生物膜生长及代谢的影响，探讨伊犁黑蜂蜂胶抗菌防龋的效果及可能的防龋机制。

    1 材料和方法

    1.1 黑蜂蜂胶醇粗提物的制备

    蜂胶采自新疆伊犁尼勒克县种蜂场。将粗蜂胶置于-20 ℃冰箱中过夜后在研钵内粉碎，使用水浴法(m︰v=1︰8)在70 ℃下水浴除蜡，再用冷浸法提纯蜂胶。称取15 g除蜡蜂胶粉碎后按照固液比1︰5的比例，加70%乙醇75 mL(虽然70%的乙醇具有一定的抑菌能力，但是蜂胶醇溶液在梯度稀释过程中乙醇的浓度也被稀释得极低，蜂胶醇溶液中所含乙醇的浓度早已不具备抑菌的能力)，封口后浸泡2周。滤去沉渣，蜂胶原重量减去沉渣干燥后的重量，配制成100 mg·mL-1蜂胶醇溶液，用1 mol·L-1NaOH调整pH=7.0后经0.22 μm的无菌滤器过滤备用[4-5]。

    1.2 实验试剂和仪器

    脑心浸液培养基(brain heart infusion，BHI)、厌氧发生剂、厌氧指示剂(梅里埃公司，法国)，无菌脱纤维蛋白羊血(新疆医科大学动物实验中心提供)，95%乙醇分析纯(天津富宇精细化工有限公司)，氯化血红素(上海源叶生物科技有限公司)，蒽酮试剂(天津市福晨化学试剂厂)，葡聚糖T-40(北京索莱宝科技有限公司)，浓硫酸(北京化工厂)。

    垂直流超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)，隔水式恒温培养箱(上海博讯实业有限公司)，厌氧罐(三菱株式会社，日本)，pH计(上海雷磁仪器厂)。

    1.3 实验菌株与菌液制备

    变异链球菌(Streptococcus mutans ATCC 25175)、表兄链球菌(Streptococcus sobrinus ATCC 6715)、血链球菌(Streptococcus sanguis ATCC 10556)、黏性放线菌(Actinomyces viscosus ATCC 19246)、内氏放线菌(Actinomyces naeslundii ATCC 12104)均购买于美国模式培养物集存库(American Type Culture Collection) ......