徐智云 刘鑫 黄兴 杨德琴

    重庆医科大学附属口腔医院牙体牙髓科·口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室，重庆 400017

    牙齿发育是一种复杂的生理过程，主要通过上皮和间充质间的相互作用完成，期间涉及多种生长因子和信号途径，在特定的时空调控下共同作用最终成形。细胞间隙连接蛋白43(connexin 43，cx43)直接调控细胞间的连接通讯，进行信息和能量的传递，进而调控细胞的新陈代谢和增殖分化等一系列生理过程[1]，在脊椎动物早期的心血管发育[2]、神经系统传导[3]、骨骼形成和矿化[4]中发挥重要作用，同时与心血管系统、泌尿生殖系统、神经系统等疾病的发生发展密切相关[5-6]。研究[7]发现，cx43基因在小鼠牙齿发育成形过程中高表达，参与牙齿发育，并且在牙齿矿化过程中发挥重要作用。cx43基因缺陷与人类常染色体显性遗传病眼-牙-指综合征(oculoden-todigital dysplasia，ODDD)相关，呈现并指、釉质发育不全和(或)颅面部畸形等表型[8]。目前cx43基因在牙齿发育和矿化过程中的具体功能尚不清楚。

    斑马鱼是一种公认的用于研究器官形成和发育相关分子生物学机制的理想模式生物，因其同哺乳动物高度的基因同源性而被广泛运用于发育生物学的研究[9]。斑马鱼牙齿的发育和替换很大程度上反映了有牙脊椎动物的原始状态[10]。本研究旨在探索cx43基因在斑马鱼牙齿发育和形成中的作用，为探究牙齿内源性再生奠定基础。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物

    野生型(wild type)斑马鱼，由西南大学分子发育实验室购进。

    1.2 主要试剂及设备

    聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。限制性内切酶(NEB公司，美国)，PCR puri fi cation Kit检测试剂盒(Qiagen公司，美国)，逆转录试剂盒(Roche公司，美国)，RNA提取试剂盒(Life Technologies公司，美国)，T4连接酶(Invitrogen公司，美国)。体视解剖显微镜(Leica公司，德国)，台式离心机(Eppendorf公司，德国)。

    1.3 动物饲养

    参照Wester fi eld[11]的方法于28.5 ℃水温、14 h光照、10 h黑暗的条件下进行饲养，按雌雄比例1︰1或1︰2放入交配缸内，次日清晨收集斑马鱼受精卵并清洗，置于28.5 ℃恒温孵育箱中培养和胚胎孵育 ......