吕雪 柳娜 杜文 李佳洋 孙玥 罗恩

    口腔疾病研究国家重点实验室 华西口腔医院正颌与关节外科(四川大学)，成都 610041

    骨缺损一般由创伤、感染、肿瘤切除或先天性疾病等造成，治疗方法包括骨移植、组织工程技术、膜引导性组织再生技术、基因疗法、生长因子疗法等。尽管骨缺损的修复已经取得很大的成就，但仍面临许多问题，其治疗方法也存在着不同的局限性。安全高效的骨缺损修复方法是目前研究的热点。

    脂联素(adiponectin，APN)也被称为脂肪细胞补体相关蛋白，抵抗素1和脂肪基因，是一种主要由脂肪组织合成和分泌的脂肪因子[1]。在不同的组织中，APN发挥着不同的作用，它与胰岛素敏感度的调节、能量平衡、动脉粥样硬化以及炎症反应密切相关。近年来，越来越多的研究发现APN与骨代谢密切相关。Lenchik等[2]发现，血清APN的浓度与骨密度呈负相关。也有学者[3-5]发现，在人类的股骨及胫骨成骨细胞表面，小鼠成骨细胞及破骨细胞表面，MG-63细胞株及成骨细胞株表面均有APN及其受体表达。采用不同方式将APN应用于牵张成骨和种植体周围成骨，在体内实验中证实APN有促进成骨的作用。本实验构建了SD大鼠胫骨骨缺损模型，采用腺病毒载体携带外源基因人APN(human APN，hAPN)，并将重组的腺病毒载体Ad-hAPNΕGFP局部注射于骨缺损处，探讨hAPN对SD大鼠骨缺损修复的影响。

    1 材料和方法

    1.1 hAPN重组腺病毒表达载体的构建

    含有重组hAPN目的基因的质粒由美国Tufs大学牙医学院Jake Chen教授提供。padTrack-CMV重组穿梭载体和pAdeasy-1重组腺病毒骨架载体由汉恒生物(上海)实验室提供。重组腺病毒Ad-hAPN-ΕGFP的构建与鉴定采用张志明等[6]的方法，构建成功后Ad-hAPN-ΕGFP病毒滴度(plaque forming unit，PFU)为每毫升1×1011个。

    1.2 动物模型建立

    取36只250～280 g的SD大鼠(四川大学华西医学实验动物中心)，雌雄不限。于双侧膝关节内侧区纵向切开皮肤、皮下组织和骨膜，显露胫骨前端，在胫骨内侧面距离生长板约1 mm处，用台式慢速牙科电钻低速钻孔制备一直径约2 mm的圆形骨缺损(生理盐水冲洗降温)，深达骨髓腔，不穿通对侧骨密质。术后分层拉拢缝合伤口，0.5%聚维酮碘消毒术区。

    36只大鼠72侧胫骨缺损随机分成A、B、C共3组，每组24侧。A组为Ad-hAPN-ΕGFP组：取10 μL Ad-hAPN-ΕGFP病毒液用0.5 mL生理盐水稀释 ......