秦子顺 殷丽华 王开娟 刘琪 程文晓 高鹏 孙可墨 钟梅 余占海

    兰州大学口腔医院修复科，兰州 730000

    牙周病是一类发生在牙周组织的慢性感染性疾病，其治疗以实现牙周组织的完全再生，恢复牙龈、牙周膜、牙槽骨和牙骨质的正常生理功能为最终目标[1]，但是目前牙周组织缺损一直未能得到完全有效的再生。近年来，组织工程技术迅猛发展，为牙周病的治疗带来了新的希望。牙周组织工程包括生长因子、支架材料及种子细胞[2]。

    淫羊藿苷(Icariin，ICA)是小檗科淫羊藿属植物，又名仙灵脾，是从淫羊藿茎叶中提取的总黄酮中的有效成分之一。ICA在促进成骨细胞增殖和分化，调节免疫，甚至抗肿瘤等方面都有重要作用[3]。理想的组织工程支架材料应具备诸多特性，如良好的生物相容性，较佳的生物可降解性，适宜的表面活性，理想的多孔性结构和高孔隙率及生物可塑性等[4]。纳米羟磷灰石(nano-hydroxyapatite，nHAC)支架是一种仿生骨纳米尺寸材料，与天然骨在纳米结构上相当接近，其孔隙率高达80%～90%，孔径100～600 μm，6个月可降解80%以上，是较理想的支架材料。已有研究[5]证实，nHAC可促进并加快骨创伤的愈合，且作用较明显。人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells，hPDLSCs)是来源于牙周组织的一类成体干细胞，能在一定条件下分化成为较成熟的成牙骨质细胞和牙周膜成纤维细胞，可在一定程度上促进牙周组织的自我更新，实现牙周组织缺损的再生[6]。本研究旨在探讨ICA对hPDLSCs增殖及骨向分化的影响，观察将ICA代替传统生长因子应用于牙周组织工程的可行性。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂与仪器

    主要试剂：α-MEM培养基，胎牛血清，Ⅰ型胶原酶，胰蛋白酶，Dispase酶(Gibco公司，美国)；ICA(中国药品生物制品检定所，批号：110737—200415)；基质蛋白-1单克隆抗体STOR-1，人CD146-FITC单克隆抗体(Beckmen Coulter公司，美国)；茜素红，地塞米松，β-甘油磷酸钠，维生素C，二甲基亚砜；nHAC材料(清华大学材料系研制)。主要仪器：CO2孵箱(Heraeau公司，德国)，YJ-875型超静工作台(苏州净化设备厂)；倒置相差显微镜及照相系统，扫描电子显微镜(scanning electron microscopy，SEM)(Olympus公司，日本)。

    1.2 原代hPDLSCs的培养、分离和鉴定 ......