储眉 廖贵清 唐文 周媛 苏宇雄 梁玉洁

    1.广州市第八人民医院口腔科，广州 510440；2.中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院口腔颌面外科，广州 510055；3.香港大学牙医学院口腔颌面外科，香港 999077

    口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是常见的头颈部恶性肿瘤，目前治疗以手术和放化疗为主，但患者5年生存率无明显提高[1]。OSCC患者存在着较严重的免疫缺陷，因此近年来提高机体免疫系统对抗肿瘤的免疫治疗成为研究热点[2-3]。在肿瘤浸润的白细胞中，髓样来源的抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell，MDSC)是免疫抑制作用网络中的重要成员[4]，构成了有着不成熟状态和抑制T细胞增殖作用的髓样细胞的异质群体。本研究建立4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitroquinoline-1-oxide，4NQO)舌癌小鼠模型，观察MDSC在舌癌小鼠中的表达，并探讨其在口腔癌中的意义。

    1 材料和方法

    1.1 4NQO舌癌模型建立

    36只雌性4～6周龄的C57BL/6小鼠及标准固体饲料均由中山大学实验动物中心提供。在无特异病原体条件下饲养，室温18～25 ℃，湿度30%～50%，24 h光暗循环条件下，标准饲料经钴60辐照后喂养。4NQO用双蒸水配制成0.5 g·L-1母液。实验组24只小鼠用避光瓶喂养，4NQO母液用灭菌普通自来水配成50 mg·L-1工作液，每周更换4NQO水，连续饮用16周后，改为饮用普通灭菌自来水至第28周。对照组12只小鼠饮用普通灭菌自来水28周。

    1.2 取材及组织病理学观察

    在第16、20、24及28周时，6只实验组小鼠及3只对照组小鼠予4%水合氯醛镇静后经眼眶取外周血，处死后取全舌标本。舌标本一半立即冰冻固定用于实时定量聚合酶链反应(quantitative real timepolymerase chain reaction，qRT-PCR)或后续免疫组织化学染色，另一半立即固定于10%中性甲醛缓冲液中，24 h后乙醇梯度脱水，石蜡包埋，4 μm切片，常规苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色。

    1.3 免疫组织化学染色

    根据组织学结果，实验分为3组：正常对照组12只，异常增生组9只，OSCC组12只。采用葡聚糖聚合物法(labelled dextran polymer method ......