申道南 成伟 贾岳 赵蕾 吴亚菲

    口腔疾病研究国家重点实验室 华西口腔医院牙周病科(四川大学)，成都 610041

    牙龈卟啉单胞菌是慢性牙周炎的主要致病菌，脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是其最重要的毒力因子之一[1]。牙龈卟啉单胞菌及其毒性产物能黏附并侵入到血管内壁中，参与心血管疾病的形成和发展[2-3]。氧化应激(oxidative stress，OS)是由于机体组织或细胞内氧自由基生成增加或清除能力降低导致体内活性氧(reactive oxygen species，ROS)自由基产生过多，氧化和抗氧化系统失衡，引起组织损伤[4]。

    在OS引起的损伤中，蛋白质损伤可产生谷胱甘肽化蛋白质结构，是引起细胞凋亡损伤及衰老的启动因子。谷氧还蛋白(glutaredoxin，Grx)是细胞抗氧化防御体系的重要蛋白，编码基因为grx1。Grx可以通过特异性催化还原谷胱甘肽化蛋白质结构以保护细胞免受OS的损害[5]。Akt是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其活性表达为磷酸化Akt(phosphorylated-Akt，p-Akt)，与OS密切相关。在OS诱导内皮细胞损伤过程中，Akt作为一种细胞存活信号被激活[6]，增加一氧化氮生成，维持内皮细胞功能[7]。Akt也是磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase，PI3K)下游的效应分子，位于PI3K/Akt通路的中心位置，可以磷酸化多种细胞因子如核转录因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)等以抑制凋亡基因的表达。许多外部刺激因素都能够激活PI3K从而促进p-Akt的表达[8]。

    基于以上研究，笔者推测Grx/Akt通路可能在调节血管内皮细胞氧化损伤过程中具有重要作用。本实验采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(realtime reverse transcription polymerase chain reaction，real-time RT-PCR)及Western blot方法，研究牙龈卟啉单胞菌LPS诱导脐静脉内皮EA-hy926细胞氧化损伤时grx1基因和Grx、Akt、p-Akt(308)蛋白表达的变化，探讨Grx在OS引发的细胞凋亡中的作用。

    1 材料和方法

    1.1 仪器设备和主要试剂

    高通量聚合酶链反应仪(Eppendorf公司，德国)，ABI7300型荧光定量分析仪(Bio-Rad公司，美国)。EA-hy926细胞由上海斯信生物科技有限公司提供 ......