唐翠竹 文勇 顾伟亭 张冰 张云鹏 姬雅雯 徐欣

    1.山东大学口腔医学院；2.山东省口腔组织再生重点实验室；3.山东大学齐鲁医院妇产科，济南 250012

    牙周膜是一个自我更新的系统，存在一类未分化的、具有自我更新和多向分化潜能的牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells，PDLSCs)[1]，它是牙周组织再生和重建的“基石”。近来的研究[2]相继证实PDLSCs是一类维持牙周组织动态平衡和缺损修复的关键细胞，然而，关于PDLSCs的诸多研究仍处于基础阶段，如何高效获得大量细胞并有效控制其定向分化仍有待于解决；PDLSCs的增殖分化受多种因素的影响，包括组织来源、供者年龄、炎性状态等[3]。YAP蛋白是Hippo信号通路中一个起中心作用的开关蛋白，YAP作为一种基因转录共激活因子在维持干细胞自我更新及分化方面起着重要作用[4]。目前PDLSCs增殖、分化的机制尚不明确，国内外也尚未见YAP对PDLSCs增殖分化具有重要调控作用的相关报导与研究。本实验拟研究小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)沉默YAP基因对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells，hPDLSCs)增殖以及凋亡的影响，为进一步研究YAP对hPDLSCs的调控奠定基础。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料

    hPDLSCs(课题组冻存)，胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)和α-MEM液体培养基(HyClone公司，美国)，Opti-MEM(Gibco公司，美国)，RNAiso Plus RNA提取试剂及反转录试剂盒、SYBR Premix Ex Taq(TAKARA公司，日本)，RIPA裂解液(北京Solarbio公司)，YAP多克隆抗体(Cell Signaling Technology公司，美国)，HRP标记山羊抗兔IgG(Jackson公司，美国)，BCA蛋白定量试剂盒及细胞周期与凋亡检测试剂盒(上海碧云天生物研究所)，细胞增殖活性检测试剂盒(cell counting kit-8，CCK-8)(日本同仁公司)，引物合成(上海博尚生物有限公司)。

    1.2 实验分组

    实验分组如下。siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3组：使用YAP-siRNA进行干预；NC组：使用非特异性siRNA进行干预；空白对照组：仅使用脂质体对细胞进行干预。YAP-siRNA碱基序列如下 ......