伍燕 邓超 杨琨 崔晓霞 刘琪 金岩

    1.遵义医学院附属口腔医院，遵义 563003；2.贵阳市口腔医院牙周科，贵阳 550002；3.第四军医大学组织工程中心，西安 710032

    糖基化终末产物(advanced glycation end products，AGEs)与糖尿病多种并发症的发生密切相关[1]。近年来，有研究[2]表明糖尿病患者晚期AGEs的大量积聚可促进糖尿病的发展，并且可诱导牙周病的发生和发展。人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells，hPDLSCs)具有自我更新和多向分化潜能，在维持牙周结构稳态方面起着重要的作用，其功能数量的变化会导致牙周膜的破坏[3]。研究[4]表明AGEs能使hPDLSCs增殖过程中的Wnt经典通路受到抑制，最终导致该细胞增殖能力有所减弱，AGEs又可以抑制该细胞的成骨分化能力，并在一定范围内呈浓度依赖性[5]。但AGEs是否影响了hPDLSCs骨向分化过程中的Wnt经典信号通路，目前尚无定论，故本实验旨在研究AGEs介导下的hPDLSCs骨向分化过程中的Wnt经典通路，并与正常细胞进行比较，从而探讨糖尿病牙周炎的发病机制。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂和仪器

    α-MEM培养基、胰蛋白酶(Gibco公司，美国)，胶原酶、胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，AGEs-BSA(Bio Vision公司，美国)，细胞总RNA提取试剂盒、一步法逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RTPCR)试剂盒(Takara公司，日本)，茜素红(上海化学试剂采购供应站)，β-链蛋白(β-catenin)兔抗人单克隆抗体(Abcam公司，美国)，体式显微镜、倒置相差显微镜以及照相系统(Olympus公司，日本)，流式细胞仪(Beckmen Coulter公司，美国)，实时聚合酶链反应(real time polymerase chain reaction，real time PCR)仪器(Applied biosystems公司，美国)。

    1.2 取材和细胞培养

    收集12～18岁因正畸需要而拔除的牙周健康、无龋坏的年轻前磨牙，PBS冲洗后刮取根中1/3牙周膜组织，移入无菌培养皿内，加入少许α-MEN培养液，将牙周膜组织锐性分离，离心后弃上清，加入胶原酶至37 ℃、CO2孵箱中消化15 min ......