平依林?娄锋?杨肖?张平口腔疾病研究国家重点实验室?华西口腔医院(四川大学)，成都?610041

    Notch1蛋白高表达抑制破骨细胞增殖和分化

    平依林?娄锋?杨肖?张平

    口腔疾病研究国家重点实验室?华西口腔医院(四川大学)，成都?610041

    [摘要]目的 ?探究体外培养条件下Notch1蛋白高表达对细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)诱导的骨髓源破骨细胞增殖分化的影响。方法 ?体外培养Rosa-notch1转基因小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)，采用RANKL和MCSF刺激BMSCs向破骨细胞方向分化。培养至第3天，实验组和对照组分别转染携带Cre重组酶和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒(Ad-Cre-GFP)和携带GFP的重组腺病毒(Ad-GFP)，启动实验组Notch1高表达，采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测Notch信号通路成分(Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、Delta1、Delta3、Delta4、Jagged1)、靶基因(Hes1)mRNA表达量以及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)在诱导后mRNA的表达量。采用TRAP染色法观察破骨细胞增殖分化情况。结果 ?TRAP染色显示实验组破骨细胞形成数量明显少于对照组(P1?材料和方法

    1.1?实验动物

    选取8周龄SPF级雄性转基因小鼠Rosa-notch1(The?Jackson?Laboratory，美国)6只，体重(19±2)?g。

    1.2?试剂

    α-MEM、胎牛血清(Hyclone公司，澳大利亚)，青霉素/链霉素(Hyclone公司，美国)，腺病毒(上海汉恒生物有限公司)，鼠重组细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate?resistant?acid?phosphatase，TRAP)、巨噬细胞集落刺激因子(macrophage?colony-stimulating?factors，MCSF)(Peprotech公司，美国)，染色试剂盒(Sigma公司，美国)，TRIzol提取液(Invitrogen公司，美国)，QuantiTect?反转录试剂盒、实时聚合酶链反应(reverse?transcription-polymerase?chain?reaction，RT-PCR)试剂盒(凯基公司，德国) ......