冯桂娟?郑科?宋冬惠?吴森斌?祝颂松?胡静.南通大学附属医院口腔科，南通?600；.口腔疾病研究国家重点实验室?华西口腔医院正颌与关节外科(四川大学)，成都?6004

    Runt相关基因2修饰的骨髓间充质干细胞促进兔下颌骨牵张成骨的研究

    冯桂娟1郑科1宋冬惠1吴森斌1祝颂松2胡静2

    1.南通大学附属医院口腔科，南通?226001；2.口腔疾病研究国家重点实验室?华西口腔医院正颌与关节外科(四川大学)，成都?610041

    [摘要]目的 探讨Runt相关基因2(Runx2)修饰的自体骨髓间充质干细胞(MSCs)促进兔下颌牵张成骨新骨形成的可行性。方法 将48只成年雄性新西兰大白兔随机分为3组：A组为Runx2重组质粒组，B组为不含Runx2重组质粒组，C组为生理盐水对照组。建立兔下颌牵张成骨模型；于牵张的第5天，A组兔牵张间隙内注射转染重组质粒adv-hRunx2-gfp的自体骨髓MSCs；B组注射转染adv-gfp质粒的自体骨髓MSCs；C组注射同体积生理盐水。在牵张结束后第8周处死所有动物，进行大体、影像学、组织学观察和三点弯曲测试。结果 CT平扫及组织学结果表明，A组牵张间隙内新骨形成和骨痂密度均明显高于B、C组；双能X线及三点弯曲测试表明，A组牵张间隙内新生骨组织密度、新生骨矿物质含量及最大载荷均高于B、C组(P1 ?材料和方法

    1.1?材料

    48只成年雄性新西兰白色家兔，体重2.6~3.0?kg。实验动物的喂养与使用遵守南通大学动物伦理委员会的有关规定。48枚单边纯钛钉、外固定牵张器由本课题组与四川大学华西口腔医院共同设计和研制。牵张器最大牵张距离为20?mm，螺距1.0?mm，使用长35?mm、直径1.8?mm的纯钛螺钉穿皮质骨固定。CT机(μ CT-80型，Scanco?Medical?AG公司，瑞士)；双能X线(dual?energy?X?ray，DXA)骨密度检测仪(FR216Ⅲ1438型，DMS公司，法国，由四川大学华西医院提供)；INSTRON?5565型生物力学测试系统(Instron公司，美国，由四川大学口腔疾病研究国家重点实验室提供)；重组腺病毒(由北京本元正阳基因技术股份有限公司构建)；兔Runx2抗体(上海博研生物工程研究中心)；兔Runx2引物(上海斯信生物科技有限公司，正向引物5’-GGAATGCCTCTGCTGTTATG-3’；反向引物5’-GGATTTGTGAAGACGGTTATGG-3’)。

    1.2?MSCs分离、培养与基因转染

    采用密度梯度离心法从兔胫骨中分离出骨髓MSCs进行培养 ......