朱卓立?马瑞阳?杨扬?甘雪琦口腔疾病研究国家重点实验室?华西口腔医院修复科(四川大学)，成都?610041

    不同频率微振动对血管内皮细胞生长因子表达及通透性的影响

    朱卓立?马瑞阳?杨扬?甘雪琦

    口腔疾病研究国家重点实验室?华西口腔医院修复科(四川大学)，成都?610041

    [摘要]目的 研究微振动对血管内皮细胞分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)及通透性的影响。方法 培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)，每日施加0.2、0.5、2、5?Hz?4种低频率微振动30?min，通过Tagman探针实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白质印迹法检测VEGF的表达，并检测内皮细胞的通透性。结果 加载0.2?Hz和0.5?Hz微振动可使血管内皮细胞VEGF?mRNA及蛋白表达上调(P<0.05)，加载2?Hz和5?Hz振动后VEGF?mRNA及蛋白表达下调(P<0.01)；加载0.2?Hz和0.5?Hz微振动可使血管内皮细胞通透性增强(P<0.01)，2?Hz和5?Hz微振动则使内皮细胞通透性降低(P<0.01)。结论 0.2~0.5?Hz的微振动可使血管内皮细胞分泌VEGF增高，并提高血管内皮细胞的通透性。

    [关键词]低频微振动； 内皮细胞； 血管内皮细胞生长因子； 通透性

    近年来，骨组织工程技术成为骨缺损修复的研究重点，其过程包括血管化、骨再生、骨端融合3个基本环节，其中血管化是骨愈合过程中最基本的环节，它能将参与骨发生与修复的相关细胞、信号分子、营养物质携带入微环境并带走新陈代谢废物及坏死分解产物以维持局部动态微环境。目前，组织工程骨血管化的主要方法包括利用血管内皮细胞生长因子(vascular?endothelial?growth?factor，VEGF)、血管生成素(angiopoietin，Ang)等与生物材料复合促进血管生长，但因其在体内迅速降解，故很难达到理想的效应浓度[1]。因此，如何促进促血管生长因子的浓度增长成为增强骨缺损修复血管化的新的突破点。既往的实验结果表明，低幅度的高频振动能有效促进血管内皮细胞的增殖能力[2]。因此本研究拟在细胞水平研究高频率低强度的微振动对血管内皮细胞VEGF表达及通透性的影响，以期为微振动在骨组织工程血管化的应用提供分子生物学基础。

    1?材料和方法

    1.1?主要材料和仪器

    人脐静脉血管内皮细胞(human?umbilical?vein?endothelial?cell，HUVEC)(美国标准生物品收藏中心提供) ......