高敬?黄文明重庆医科大学附属口腔医院牙体牙髓病科·口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室·重庆市高校市级口腔生物医学工程重点实验室，重庆?401147

    变异链球菌耐酸毒力因子质子移位膜ATP酶在龋病进展中的动态变化

    高敬?黄文明

    重庆医科大学附属口腔医院牙体牙髓病科·口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室·

    重庆市高校市级口腔生物医学工程重点实验室，重庆?401147

    [摘要]目的 研究变异链球菌耐酸毒力因子质子移位膜ATP酶(F-ATPase)在不同pH环境和龋病发生发展过程中的表达，评价F-ATPase在龋病进展中的动态变化。方法 将变异链球菌菌悬液在不同pH(pH4.0～7.0)和不同葡萄糖浓度(含5%和不含葡萄糖)的BHI液体培养基中培养，检测F-ATPase基因的表达水平。将雄性Wistar大鼠随机分成致龋组和对照组，其中致龋组喂养致龋饲料及5%葡萄糖水，对照组喂养普通饲料。每2周采集菌斑样本，检测F-ATPase基因的表达水平。第11周时取大鼠上下颌骨标本，对磨牙进行龋损评定。结果 1)5%葡萄糖浓度下变异链球菌F-ATPase基因的表达高于不含葡萄糖(P1?材料和方法

    1.1?实验菌株及动物

    变异链球菌(Streptococcus mutans，S. mutans)标准株UA159由四川大学口腔疾病研究国家重点实验室提供。18?d龄的雄性Wistar大鼠购于重庆医科大学实验动物中心，许可证编号为SYXK(渝)2012-0001。

    1.2?主要试剂及仪器

    BHI培养基(OXOID公司，英国)，YJ-875型超净工作台(苏州市华宇净化设备有限公司)，FQ-聚合酶链反应(polymerase?chain?reaction，PCR)仪(Bio-Rad公司，美国)?，200型分光光度计(Thermo?Fisher公司，美国)，pH计(Mettler?Toledo公司，瑞士)，Bio-Rad电泳仪(Bio-Rad公司，美国)。

    1.3?引物设计

    根据GenBank报道的变异链球菌F-ATPase β亚基基因[4]序列及16sRNA基因序列(GenBank?accession?number?NC_004350)，采用Primer?primer?5.0计算机软件设计引物。F-ATPase上游引物?5’-CGGATGCGTGTTGCTCTTACTG-3’，下游引物5’-GGCTGATAACCAACGGCTGATG-3’；16sRNA上游引物5’-TGGAACTGAGACACGGTCCA-3’ ......