吴昕彧 陈晓丹 赵望泓 侯晋 陈璇南方医科大学南方医院·南方医科大学口腔医学院，广州 510515

    变异链球菌磷酸转移酶系统ptxA、ptxB基因对细菌生长能力的影响

    吴昕彧陈晓丹赵望泓侯晋陈璇

    南方医科大学南方医院·南方医科大学口腔医学院，广州 510515

    [摘要]目的研究变异链球菌(S.mutans)磷酸转移酶系统(PTS)中抗坏血酸家族ptxA、ptxB基因对细菌生长能力的影响。方法构建ptxA、ptxB和ptxAB双重基因缺陷菌株以及ptxAB功能补偿菌株。在仅以抗坏血酸作为唯一碳源时，使用实时荧光定量聚合酶链反应检测野生株中ptxA、ptxB基因的表达情况。连续监测野生株、缺陷株和补偿株的菌液OD600值，比较其生长能力。结果经过聚合酶链反应和测序鉴定，结果证明缺陷株和补偿株构建成功。在以抗坏血酸作为唯一碳源的培养基中，野生株ptxA、ptxB基因的表达量均明显增高(P1 材料和方法

    1.1菌株及培养条件

    本实验所用菌株S.mutans UA159(北京大学口腔医学院中心实验室惠赠)采用脑心浸液(brain heart infusion，BHI)培养基(青岛海博生物技术有限公司)培养，或采用添加不同浓度葡萄糖(Sigma公司，美国)或抗坏血酸(Sigma公司，美国)的TV培养基(含3.5%胰蛋白胨、0.04 μg·mL-1对氨基苯甲酸、0.2 μg·mL-1盐酸硫胺酸、1 μg·mL-1烟酰胺和0.2 μg·mL-1核黄素)(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)进行培养。选择性BHI培养基采用壮观霉素(spectinomycin，spe)(Sigma公司，美国)抗性，spe的浓度为1 mg·mL-1。S.mutans的培养条件为37 ℃，厌氧培养(10%CO2、10%H2、80%N2)。E.coli DH5α[天根生化科技(北京)有限公司]采用Luria-Bertani(LB)培养基(青岛海博生物技术有限公司)培养，选择性LB培养基采用spe抗性，spe的浓度为0.1 mg·mL-1。E.coli的培养条件为37 ℃，200 r·min-1振荡培养。

    1.2ptxA、ptxB、ptxAB缺陷菌株及ptxAB功能补偿菌株的构建

    根据NCBI提供的S.mutans UA159全基因组序列，利用Primer Premier 5.0软件针对ptxA、ptxB及ptxAB设计引物，具体见表1。 ......