代晓华 张军 邹慧儒 连小丽 李燕妮 王冠华 颜艳

    1.天津市口腔医院·南开大学口腔医院中心实验室；2.颌面外科，天津 300041

    ·口腔肿瘤学专栏·

    上皮膜蛋白1真核表达载体的构建及其对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

    代晓华1张军2邹慧儒1连小丽1李燕妮1王冠华1颜艳1

    1.天津市口腔医院·南开大学口腔医院中心实验室；2.颌面外科，天津 300041

    目的构建上皮膜蛋白1(EMP1)基因真核表达载体pEGFP-N1-EMP1，探讨EMP1基因对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响。方法采用逆转录聚合酶链式反应(PCR)扩增EMP1基因，双酶切法连接至真核表达载体pEGFP-N1双酶切产物大片段，构建pEGFP-N1-EMP1重组质粒。经测序鉴定后，通过脂质体介导法将pEGFP-N1-EMP1重组质粒和pEGFP-N1空载体转染至人舌鳞状细胞癌Tb3.1细胞，荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白的表达情况，实时荧光定量PCR法检测转染后24、48、72 h的EMP1过表达水平。利用Transwell迁移及侵袭实验分析EMP1过表达对Tb3.1细胞迁移及侵袭能力的影响。结果成功克隆EMP1全长基因，经测序分析证实将EMP1基因准确插入真核表达载体pEGFP-N1，转染后细胞可见绿色荧光表达。实时荧光定量PCR结果显示，pEGFP-N1-EMP1重组质粒转染24 h组，Tb3.1细胞中EMP1表达量显著高于pEGFP-N1空载体组、野生型细胞组以及重组质粒转染48 h和72 h组。Transwell迁移及侵袭实验结果显示，EMP1过表达抑制了Tb3.1细胞的迁移和侵袭能力。结论成功构建了EMP1真核表达载体，并在体外证实了EMP1过表达可抑制舌鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭能力，为进一步研究EMP1基因在口腔鳞状细胞癌转移中的作用及其分子机制奠定了基础。

    上皮膜蛋白1；舌鳞状细胞癌细胞；载体；转染；细胞迁移；细胞侵袭

    口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤，近几十年，虽然外科手术及放射等治疗手段得到不断发展，但OSCC患者5年生存率却未能得以显著提高，肿瘤区域性和远处转移是导致治疗失败的主要原因之一[1]。由于舌的淋巴和血运丰富，舌鳞状细胞癌更易发生转移，患者术后发生颈淋巴结转移者大约54%，而隐匿性颈转移率也可达42%[2]。临床常用的肿瘤辅助检查方法，如超声、CT、MRI和正电子发射计算机断层扫描(positron emission computed tomography ......