安洋 张慧宇 郭俊峰 李鑫 杨阳 张纲 谭颖徽

    第三军医大学新桥医院口腔颌面外科，重庆 400037

    降钙素基因相关肽对血清饥饿作用下MC3T3-E1成骨细胞凋亡和自噬的影响

    安洋 张慧宇 郭俊峰 李鑫 杨阳 张纲 谭颖徽

    第三军医大学新桥医院口腔颌面外科，重庆 400037

    目的 研究血清饥饿条件下降钙素基因相关肽(CGRP)对小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡、自噬的影响以及二者之间的关系，以进一步明确CGRP对成骨细胞的保护机制。方法体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞。采用流式细胞术和蛋白质印迹检测正常血清、无血清(血清饥饿)、3-MA预处理+血清饥饿培养的成骨细胞的凋亡和微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达。采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7mol·L-1)CGRP培养的成骨细胞的LC3和P62蛋白表达；采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10-8mol·L-1CGRP培养不同时间(2、6、12、24、48、72 h)的成骨细胞的LC3蛋白表达，流式细胞数检测细胞凋亡，MDC染色检测细胞自噬泡。采用流式细胞术检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10-8mol·L-1CGRP、3-MA预处理+血清饥饿、3-MA预处理+血清饥饿+10-8mol·L-1CGRP培养24 h的成骨细胞的凋亡。结果血清饥饿培养时成骨细胞的LC3Ⅱ蛋白表达及细胞凋亡较正常血清时增加，3-MA预处理+血清饥饿培养时成骨细胞的凋亡较血清饥饿时增加(P<0.01)。与正常血清相比，血清饥饿、血清饥饿+CGRP培养时LC3Ⅱ蛋白表达增加，P62蛋白表达降低，以血清饥饿+10-8mol·L-1CGRP培养24 h时LC3Ⅱ/Ⅰ比值最高；血清饥饿+10-8mol·L-1CGRP培养能抑制成骨细胞的凋亡，促进自噬泡的合成。3-MA预处理后MC3T3-E1成骨细胞凋亡增加，CGRP部分逆转3-MA预处理所增加的成骨细胞凋亡。结论CGRP能够增强血清饥饿下MC3T3-E1成骨细胞的自噬活性，并可能通过促进自噬抑制成骨细胞的凋亡。

    降钙素基因相关肽； 成骨细胞； 自噬； 凋亡

    成骨细胞作为参与骨修复的重要细胞之一，主要依赖于微环境中源源不断的促生存信号才能维持其正常的生理功能；当存在疾病或损伤导致营养因子供应受到限制时，细胞将会发生过度的凋亡，从而严重影响到骨的修复。目前已有大量的生长因子被证明在骨修复中具有重要的作用，但骨修复本身是一个高度精密复杂的调控过程 ......