杜样 袁帅 周志斐 邬礼政 汪璐璐 吴兴安 王小竞

    1.军事口腔医学国家重点实验室，国家口腔疾病临床医学研究中心，陕西省口腔疾病临床医学研究中心，第四军医大学口腔医院儿童口腔科，西安 710032；2.武警后勤学院附属医院口腔科，天津 300300；3.第四军医大学微生物学教研室，西安 710032

    尼古丁调控人牙周膜细胞自噬水平的实验研究

    杜样1袁帅1周志斐1邬礼政2汪璐璐1吴兴安3王小竞1

    1.军事口腔医学国家重点实验室，国家口腔疾病临床医学研究中心，陕西省口腔疾病临床医学研究中心，第四军医大学口腔医院儿童口腔科，西安 710032；2.武警后勤学院附属医院口腔科，天津 300300；3.第四军医大学微生物学教研室，西安 710032

    目的 探讨尼古丁对人牙周膜细胞(hPDLCs)自噬水平的影响。方法选取因正畸治疗而拔除的前磨牙，采用组织块法分离培养hPDLCs。通过Western blot法筛选尼古丁影响hPDLCs自噬的最佳作用时间及浓度，使用透射电子显微镜(TEM)和免疫荧光染色法检测该作用时间及浓度下hPDLCs自噬体形成情况和自噬标志蛋白LC3的表达情况。结果LC3Ⅱ蛋白表达在尼古丁作用的12 h内持续升高，从而确定12 h为最佳作用时间；LC3Ⅱ蛋白表达上调具有尼古丁浓度依赖性，1×10-5mol·L-1为尼古丁最佳作用浓度。TEM和免疫荧光染色证实尼古丁在此浓度及作用时间下hPDLCs细胞质内自噬体的数量增加，自噬标志蛋白LC3表达升高。结论在一定条件下，尼古丁能够上调hPDLCs自噬水平，为进一步研究细胞自噬与吸烟相关牙周炎的关系奠定了基础。

    人牙周膜细胞； 尼古丁； 自噬

    近年来，流行病学调查和临床病例研究[1-2]均证实，吸烟是牙周炎发生发展的重要危险因素。吸烟者牙周炎患病率高、病情重，且治疗效果和预后均较差。尼古丁作为烟草中的主要毒性物质，除能影响牙周膜细胞的增殖分化能力外[3]，还可调控细胞因子的释放，发挥间接性组织破坏作用[4]。

    自噬是真核细胞的一种高度保守的生物学行为，是细胞自体吞噬、消化的过程。自噬过程中，细胞通过双层膜结构包裹受损的蛋白质和细胞器，运送到溶酶体中进行代谢，缓解应激压力，维持代谢平衡。在低氧、营养匮乏等不利微环境下，细胞通过激活、上调自噬水平来降解细胞内蛋白聚集体、氧化脂质、受损细胞器等物质以维持活性[5-6]。

    尼古丁可以通过调控多种细胞自噬水平参与机体的病理生理过程。研究[7]证实，尼古丁可以激活神经母细胞瘤细胞SH-SY-5Y的自噬水平 ......