梁熙陈国庆田卫东

    1.口腔疾病研究国家重点实验室，国家口腔疾病临床研究中心，

    四川大学华西口腔医院创伤与整形外科；

    2.口腔再生医学国家地方联合工程实验室 华西口腔医院(四川大学)，成都 610041

    低氧对人牙囊细胞生物学特性的影响

    梁熙1,2陈国庆2田卫东1,2

    1.口腔疾病研究国家重点实验室，国家口腔疾病临床研究中心，

    四川大学华西口腔医院创伤与整形外科；

    2.口腔再生医学国家地方联合工程实验室 华西口腔医院(四川大学)，成都 610041

    目的 研究低氧对人牙囊细胞(hDFCs)生物学特性的影响。方法 利用组织块酶消化法从年轻恒牙中分离培养hDFCs；采用免疫荧光技术检测细胞表面标志物，多向诱导实验检测细胞多向分化潜能；模拟体外低氧微环境，将细胞分为常氧组(20%O2)和低氧组(2%O2)，分别对两组细胞行Transwell小室试验检测低氧对细胞迁移的影响，采用CCK-8法检测低氧对细胞增殖的影响。通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot分别从基因和蛋白水平检测hDFCs多能性相关标志物于不同氧体积分数下的表达；分别对两组细胞进行成骨诱导，qRT-PCR检测成骨相关基因，茜素红染色评估矿化结节的形成。结果 hDFCs具有较强的干细胞特征，具有成骨、成脂及成神经多向分化能力，符合间充质干细胞基本标准，能够满足牙组织工程构建对种子细胞的需求。低氧有利于hDFCs多能性的保持，同时促进了hDFCs的迁移和增殖。hDFCs于低氧中进行诱导时，其成骨分化能力得到增强。结论 低氧微环境对维持hDFCs多能性，促进hDFCs增殖、迁移和分化有重要作用。

    低氧； 人牙囊细胞； 增殖； 迁移； 分化

    牙囊是牙萌出之前包绕牙胚的一层疏松结缔组织，该组织被认为含有干细胞和形成牙周组织的前体细胞亚群[1]。在一定的条件下，牙囊细胞(dental follicle cells，DFCs)可分化为牙周膜细胞、成牙骨质细胞及成骨细胞，分别形成牙周膜、牙骨质和牙槽骨[2]。目前认为，DFCs具有强大的多向分化能力，可以促进牙组织结构和功能的修复，因而备受关注。人DFCs(human DFCs，hDFCs)可从临床年轻患者拔除的第三磨牙中分离获得，培养至多代后仍然具有强大的组织再生能力[3]，而且因其来源于自体组织，可以避免产生免疫排斥反应，因而hDFCs被认为是应用于牙本质、牙周再生最合适的种子细胞之一。

    目前体外培养牙源性细胞时 ......