徐高丽柳毅吴立立史秋涛霍光谷志远

    1.浙江中医药大学口腔医学院；2.浙江医院口腔科，杭州 310053；3.荷兰阿姆斯特丹大学口腔种植和修复中心，阿姆斯特丹 1011-1109

    柚皮苷协同骨形态发生蛋白-2促进小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖和分化的研究

    徐高丽1,2柳毅1,3吴立立1史秋涛1霍光1谷志远1

    1.浙江中医药大学口腔医学院；2.浙江医院口腔科，杭州 310053；3.荷兰阿姆斯特丹大学口腔种植和修复中心，阿姆斯特丹 1011-1109

    目的 研究柚皮苷(NAR)联合骨形态发生蛋白(BMP)-2对体外培养的成骨前体细胞MC3T3-E1增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及成骨相关基因ALP、骨钙素(OCN)、成骨特异性转录因子(Runx2)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的影响。方法 以成骨细胞株MC3T3-E1为体外药效的试验模型，通过A lamar blue法检测第1、4和7天3种不同浓度NAR(10、100和1 000 μmol·L-1)单独作用以及分别与50 ng·m L-1BMP-2联合诱导对MC3T3-E1细胞增殖能力的影响。同时在第4天和7天测定成骨细胞内ALP活性，采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、ColⅠ的表达。结果 单纯NAR刺激及联合BMP-2刺激能够促进细胞增殖，在NAR浓度为100 μmol·L-1时达到高峰(P1 材料和方法

    1.1 试剂和仪器

    成骨前体细胞系MC3T3-E1(上海中科院细胞库)；中药NAR单体(南京泽朗医药科技有限公司)；细胞培养基α-MEM和胎牛血清(GibcoTMInvitrogen公司，美国)；rhBMPs(R&D Systems Inc，美国)；细胞裂解液(Sigma-Aldrich公司，美国)；ALP检测试剂盒(W ako Pure Chem icals公司，日本)；BCA蛋白检测试剂盒(上海碧云天生物技术公司)；总RNA抽提试剂盒(Giagen GmbH公司，德国)；逆转录反应和实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)试剂盒(TaKaRa公司，日本)。

    1.2 方法

    1.2.1 实验设计分组 实验共分8组：1)对照组(A组)；2)50 ng·m L-1BMP-2(B组)；3)10 μmol·L-1NAR(C组)；4)10 μmol·L-1NAR+50 ng·m L-1BMP-2(D组)；5)100 μmol·L-1NAR(E组)；6)100 μmol·L-1NAR+50 ng·m L-1BMP-2(F组)；7)1 000 μmol·L-1NAR(G组)；8)1 000 μmol·L-1NAR+50 ng·m L-1BMP-2(H组) ......