闫娈 杨德琴

    重庆医科大学附属口腔医院牙体牙髓病科，口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室，重庆市高校市级口腔生物医学工程重点实验室，重庆 401147

    尼古丁通过调控Toll样受体4抑制牙周膜干细胞的成骨分化能力

    闫娈 杨德琴

    重庆医科大学附属口腔医院牙体牙髓病科，口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室，重庆市高校市级口腔生物医学工程重点实验室，重庆 401147

    目的探讨尼古丁对牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖和成骨分化能力的调控作用，检测尼古丁能否通过调控Toll样受体4(TLR4)抑制PDLSCs的增殖及成骨分化能力。方法培养PDLSCs，采用流式细胞仪检测PDLSCs表面抗原标志，WST-1试剂盒检测不同浓度尼古丁刺激后PDLSCs增殖能力的改变。采用茜素红染色观察PDLSCs经不同浓度尼古丁刺激和成骨诱导后的矿化结节生产情况。运用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测经尼古丁刺激后，PDLSCs成骨能力相关基因和蛋白的改变，以及尼古丁联合TLR4抑制剂TAK-242刺激后，PDLSCs成骨能力相关基因及蛋白的改变。。结果培养的细胞表达间充质干细胞表面标志物CD90和CD105，证实为PDLSCs。与对照组相比，培养3 d后，尼古丁浓度为10-4mol·L-1的PDLSCs的增殖能力受到明显抑制(P<0.05)；成骨诱导21 d后，10-4mol·L-1尼古丁刺激组茜素红染色矿化结节明显减少。RT-PCR反应及Western blot显示：与对照组相比，尼古丁刺激组PDLSCs的碱性磷酸酶、骨钙素、Runt相关转录因子2的基因及蛋白表达量均降低(P<0.05)，加入TLR4抑制剂TAK-242后，尼古丁的抑制效应减弱。结论 尼古丁可能通过TLR4信号通路抑制PDLSCs的增殖及成骨分化能力。

    尼古丁； 牙周膜干细胞； Toll样受体4； 成骨分化

    慢性牙周炎是最常见的口腔疾病之一，可引起中老年人牙齿缺失，严重影响口腔健康。吸烟是导致慢性牙周炎的关键因素，烟叶中所含的尼古丁是损害牙周组织的重要危险因子[1]。研究[2-3]发现，在牙周治疗期间，不吸烟的牙周炎患者的疗效明显好于吸烟者，吸烟会加重牙周炎患者牙周组织的附着丧失及牙槽骨的吸收和破坏。牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells，PDLSCs)具有干细胞所特有的自我更新和多向分化能力，经成骨诱导后能向成骨方向分化。临床上可运用该特性进行牙周组织缺损的修复[4]。PDLSCs可表达Toll样受体4(Tolllike receptors 4 ......