朱震坤 王羽裳 徐欣

    山东大学口腔医学院·口腔医院种植科 山东省口腔组织再生重点实验室 山东省口腔生物材料与组织再生工程实验室，济南 250012

    热休克蛋白(heat shock protein，Hsp)是一种在进化过程中存在着高度保守性的分子伴侣家族，能够阻止肿瘤细胞凋亡，且与其转移有密切关系[1]。Hsp27是小热休克蛋白家族的重要一员，在细胞受到不良刺激时产生，以保护细胞免受环境中自由基、热、缺血和毒性物质等各种应激因素导致的损伤，已被证实在细胞分子信号通路的调节，细胞生长、分化和恶化等方面起着重要作用[2-4]。近年来，有报道[5-9]显示Hsp27与多种肿瘤的发生和转移有关。在课题组前期研究[10]中，成功建立了头颈部鳞状细胞癌转移模型，发现头颈部鳞状细胞癌Hsp27随其转移潜能的增加，表达丰度升高。为了进一步研究证实Hsp27在头颈部鳞状细胞癌转移中的作用，本研究构建Hsp27短发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)慢病毒载体，转染高转移潜能头颈部鳞状细胞癌细胞UM-SCC-22B，观察长效沉默Hsp27后其转移生物学行为的改变。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    Hsp27 shRNA慢病毒载体质粒pLKO.1(Open Biosystem公司，美国)；pLKO.1空白对照质粒为美国密歇根大学载体中心自行构建并鉴定；病毒颗粒pLenti-shRNA-Hsp27/pLenti-shRNA-ctrl由密歇根大学载体中心包装生产。

    细胞系UM-SCC-22B为美国密歇根大学肿瘤中心Thomas.E.Carey实验室保存头颈部鳞状细胞癌高转移潜能细胞系，是下咽部原位鳞状细胞癌同期淋巴转移灶细胞；所有细胞均于37 ℃、5%CO2细胞培养箱内常规孵育。

    改良伊格尔培养基(Dulbecco’s modified Eagle medium，DMEM)、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶、双抗(青霉素100 μg·mL-1，链霉素100 μg·mL-1)(GIBCO公司，美国)；Trizol试剂(Invitrogen公司，美国)，RNA逆转录试剂盒、引物合成及实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)试剂盒(Applied Biosystems公司，美国)，抗Hsp27/β肌动蛋白单克隆抗体(Cell Signaling Technology公司 ......