miR-204-5p靶向溴结构域蛋白4对舌鳞状细胞癌细胞SCC25增殖和迁移侵袭的影响研究
细胞系,荧光素酶,质粒,1材料和方法,1实验材料,2细胞培养,3细胞转染与分组,4RT-qPCR分析miR-204-5p和BRD4mRNA表达水平,5CCK8实验检测细
郑晶 张雨温 李天客 包阳 张素欣河北医科大学第四医院口腔科,石家庄 050011
舌鳞状细胞癌的患病率约占口腔癌的43%,是一种常见的具有强浸润性、高淋巴结转移率的口腔癌[1-2]。研究[3-4]指出,舌鳞状细胞癌近些年来的患病率在全球范围内呈上升趋势且年龄呈年轻化趋势,其患病率不仅与年龄、性别和种族有关系,还与个人口腔卫生、吸烟、酗酒等生活习惯息息相关。目前,舌鳞状细胞癌临床治疗采用的仍是以手术治疗为主,放化疗为辅的治疗方法。尽管近几十年来治疗水平有所提高,但是患者5年存活率却没有大幅度提升[5]。舌是人体行使语言、进食等生理功能必不可缺少的器官,舌鳞状细胞癌严重影响着患者的生理和心理健康,改进治疗手段、尽可能地保留舌体健康结构、提高生存率是目前面临最大的技术挑战。
微小RNA(microRNA,miRNA)是一种广泛存在于真核生物的长度为22 nt左右的小分子非编码RNA,它们能特异性识别下游靶基因mRNA的3’端非翻译区(3’-untranslated region,3’UTR),并通过与之结合促进mRNA发生降解进而抑制靶基因的翻译过程[6]。大量的研究[7-8]表明,miRNA与肿瘤密切相关,可作为肿瘤抑癌或致癌因子参与肿瘤细胞生长、增殖、分化和凋亡等生物功能。据报道[9],有多种miRNA参与了口腔鳞状细胞癌的发生进程,其中miR-146a、miR-155、miR-21等发挥促癌作用,而miR-218、miR-29a等则具有抑癌作用。此外,miR-204-5p被证实对癌细胞具有抑制作用,在多种癌症均下调表达[10-11],然后关于其在舌鳞状细胞癌中的作用机制却鲜有报道。因此,本研究将通过实验探讨miR-204-5p在舌鳞状细胞癌中的表达模式和可能的作用机制,为舌鳞状细胞癌发病机制以及治疗研究提供一定的理论依据。
1 材料和方法
1.1 实验材料
舌鳞状细胞癌组织和癌旁组织标本来自2016年10月至2018年5月在河北医科大学第四医院行根治性手术切除的42例舌鳞状细胞癌患者,人口腔上皮HOEC细胞系和舌鳞状细胞癌细胞SCC9、SCC25购于北京北纳创联生物技术研究院。
溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)、甘油醛3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)小鼠一抗(Sigma公司,美国),HRP兔抗鼠二抗(Abcam公司,英国) ......
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