孙巧珍 石凡 罗丹 徐婷 王升志

    1.青岛大学口腔医学院，青岛 266003；2.青岛大学附属烟台毓璜顶医院口腔颌面外科，烟台 264000

    患者自身肿瘤细胞免疫原性较弱，免疫细胞较少浸润肿瘤组织，加之免疫抑制微环境的存在，使得免疫治疗仍面临单独治疗疗效不理想，患者响应率低等诸多问题[1-4]。因此，寻求更多增强肿瘤细胞免疫原性的方法与途径，有助于提高肿瘤治疗的疗效[5]。近年来的研究[2,6-10]发现，部分特定的化疗药物、紫外线、γ 射线及光热治疗，在诱导肿瘤细胞发生凋亡的同时，会促使其表达与释放一系列损伤相关分子模式(danger associated molecular patterns，DAMPs)，可作为一种内源性危险信号，增强肿瘤细胞免疫原性，并进一步介导抗肿瘤免疫反应。热疗(hyperthermia，HT)与化疗联合应用时的协同增敏作用已在多种类型癌症治疗中得到验证[11-13]。既往的研究[14-15]证实，热化疗可提高荷瘤宿主及口腔癌患者体内细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lym-phocyte，CTL)和自然杀伤细胞(natural killer cell，NK cell)的数目及活性，白细胞介素-2 (interleukin-2，IL-2)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)的活性水平，并促进热休克蛋白(heat shock protein，HSP)70在肿瘤细胞特异性的高表达等。本研究选取3株口腔鳞状细胞癌不同细胞系，探讨热化疗诱导口腔鳞状细胞癌细胞表达DAMPs，从而增强免疫原性的作用，以期为热化疗与免疫疗法联合治疗口腔鳞状细胞癌提供思路。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    口腔鳞状细胞癌CAL27、SCC-15和Tca8113细胞(烟台毓璜顶医院中心实验室、青岛市立医院实验室提供)；1640培养基及胎牛血清(Biological Industries BI公司，以色列)；胰蛋白酶、DMSO等(Gibco公司，美国)；CCK-8试剂(上海碧云天生物技术有限公司)；Anti-Calreticulin antibody(Ab-cam公司，英国)；FITC Annexin V Apoptosis Detec-tion kit Ⅰ(BD Biosciences公司，美国)；注射用盐酸平阳霉素(pingyangmycin，PYM)(吉林敖东药业集团延吉股份有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 将保存于液氮罐中的口腔鳞状细胞癌CAL27、SCC-15和Tca8113细胞取出置于37 ℃水浴锅快速解冻 ......