王林 王熙 季楠 李海梅 蔡世新

    1.衡水市人民医院口腔正畸修复科，衡水 053000；2.承德护理职业学院口腔教研室，承德 067000

    牙齿发育不良是指患儿的上下牙齿对位不良，影响日常生活，通常采用正畸治疗[1-2]，主要通过牙齿矫形器，给予适当的、持续的力量，使牙位移动，从而达到矫正效果[3-4]。既往研究[5-6]主要集中于分析牙周膜的作用，即牙周膜组织在持续应力刺激下可以不断的形成新的骨性结构，促进牙槽骨的改建，从而达到矫形的目的，但是具体的机制尚未明了。

    近年来，随着人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells，hPDLSC)的分离成功，研究的热点主要集中于牙周膜干细胞的成骨分化方面[7-8]。本研究以hPDLSC为研究对象，构建体外机械牵张应力细胞模型，以新型机械激活性离子通道压电蛋白Piezo1为切入点，构建Piezo1蛋白的过表达载体和siRNA干扰载体，从过表达Piezo1蛋白和抑制Piezo1蛋白两个方向上探究Piezo1蛋白在hPDLSC向成骨细胞分化的作用机制。以成骨基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、Runt相关基因2(Runt-related transcription factor 2，Runx2)、骨钙素(os teocalcin，OCN)和骨涎蛋白(bone sialoprotein，BSP)为成骨的标志物[9-12]，探究Piezo1在促进hPDLSC成骨分化方面的作用。

    1 材料和方法

    1.1 hPDLSC的分离、培养

    选取2016年1月1日—2018年1月1日就诊于北京儿童医院正畸科的8～14岁儿童因阻生而拔出的年轻恒牙的牙周膜组织为细胞来源，研究方案通过北京儿童医院伦理委员会同意并通过，取得儿童直系监护人的知情同意授权书。纳入标准：所有儿童均无活动性牙齿感染，细胞均来源于因阻生而拔出的恒牙牙周膜组织。排除标准：有明显牙周炎或感染症状的患儿。

    收集牙周膜组织后采用酶消化法提取hPDLSC。采用眼科剪和无菌刀片刮取牙周膜组织，用预热的PBS溶液冲洗3次，加入Ⅰ型胶原蛋白酶消化处理50 min，置于37 ℃恒温箱中，每5 min摇晃一次，使牙周膜组织与胶原蛋白酶充分混合，常温离心机3 000 r·min-1离心5 min，弃掉上清液，加入含15%胎牛血清的DMEM培养基，制成细胞悬液，然后接种于25 cm×25 cm的Flask’s培养瓶中，放入37 ℃ ......