施琳俊 杨溪 吴苏宁 刘伟

    1.上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院口腔黏膜病科，国家口腔疾病临床研究中心，上海市口腔医学重点实验室/上海市口腔医学研究所，上海200011；2.上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院口腔颌面头颈肿瘤科，上海200011；3.江南大学附属医院(第三人民医院)口腔科，无锡214000

    口腔白斑(oral leukoplakia)是一种常见的口腔黏膜潜在恶性疾病，是口腔鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)的重要来源[1]。白斑的癌变率为4%～18%[1-4]。上皮异常增生是白斑重要的病理特征，从无异常增生、轻-中-重度异常增生到癌变进程各阶段较明确，白斑发生发展到癌变是肿瘤发生的良好研究模型。细胞低氧感知与响应的研究提示细胞缺氧微环境是恶性肿瘤发生的重要条件[5]。微小RNA(microRNA，miRNA)是长度在22 个核苷酸左右的非编码单链RNA，参与转录后基因调控。研究[6-7]显示，miRNA 对缺氧应答基因起着重要调控作用，并参与肿瘤发生。本研究利用人转录组芯片研究口腔白斑患者病损发生发展中的缺氧应答基因及相关miRNA，并验证癌变进程中的关键基因及其相关miRNA的表达。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    纳入转录组芯片研究的组织包括3例正常口腔黏膜、8 例口腔白斑、6 例口腔早期鳞癌(T1-2N0M0)。收集于2014 年9—12 月上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔黏膜科和颌面头颈肿瘤科。8 例口腔白斑中，4 例无/轻度上皮异常增生，4 例中-重度上皮异常增生，本研究将其分别归为低危白斑和高危白斑。纳入差异基因验证表达研究的组织包括6 例正常黏膜、12 例口腔白斑、12 例口腔早期鳞癌，收集于2018 年6—12 月上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔黏膜科和颌面头颈肿瘤科。以上组织病理学诊断是依据世界卫生组织肿瘤分类标准[8]，由上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔病理科医师确认。组织样本为活检或手术后标本，放入装有RNAlater 液的冻存管，立即置入液氮保存15 min 以上，然后转入-80 ℃冰箱保存。所有患者术前均未进行化疗、放疗及激素等治疗，且无自身系统性疾病和癌症史。正常黏膜、口腔白斑和早期鳞癌3组患者的年龄和性别等因素均无统计学差异。研究对象均签署知情同意书，本研究获得上海交通大学医学院附属第九人民医院伦理委员会批准(2016-80-T37)。

    1.2 总RNA提取和质检 ......