司雨婷 宋金花 方珍 韩晓哲 蒋少云

    1.天津医科大学口腔医院牙周科，天津300070；2.北京大学深圳医院口腔医学中心牙周科，深圳518036；3.美国哈佛大学牙学院Forsyth研究所，美国剑桥02146

    牙周炎是一种慢性感染性疾病，免疫炎症机制起了重要作用，其中包括淋巴细胞和细胞因子[1-2]。淋巴细胞既可以保护机体，也可以引起牙周组织的破坏[2-4]。microRNAs(miRs)约含有22个碱基，能通过结合靶基因的非转录区下调靶基因的表达，从而在炎症免疫中扮演关键的角色[5-7]。已有研究[8-9]表明miRs 在牙周炎中起着重要的作用。研究发现miR-128能调节牙周致病菌——牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，P.gingivalis)刺激下巨噬细胞的炎症反应[10]，miR-24 作为负调节因子参与被P. gingivalis脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)激活的巨噬细胞极化[11]。miR-146a缺乏导致T滤泡辅助细胞和生发中心B细胞的聚集，增强生发中心反应[12]。而且P. gingivalis能激活淋巴细胞引起牙周炎症[13-14]。前期研究[15-17]发现miR-146a 能抑制人牙龈成纤维细胞、牙周膜成纤维细胞和B 细胞分泌因子，如白细胞介素(interleukin，IL)1β、IL-6 和肿瘤坏死因子α，从而参与牙周炎的调节。虽然淋巴细胞在牙周炎免疫调节过程中起着重要的作用[2]，但miR-146a如何调节淋巴细胞尚不知。本研究目的是探索miR-146a对P. gingivalisLPS 刺激下淋巴细胞中细胞因子分泌的作用，为进一步阐明miR-146a 对牙周炎症的调节作用提供实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料和试剂

    C57BL/6小鼠(8～10周，美国Jackson实验室)；改良伊格尔培养液(Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium)、胎牛血清、青霉素、链霉素、左旋谷氨酸和两性霉素B、ACK 红细胞裂解液(Gibco 公司，美国)，P.gingivalisLPS(Strain ATCC 33277，InvivoGen 公司，美国)，miR-146a 模拟物、miR-146a 抑制剂或阴性RNA 对照、HiPerFect 转染试剂(Qiagen 公司，美国)，PureLink?RNA Mini Kit 和SuperScript Ⅱ逆转录酶(Invitrogen 公司 ......