李欣蔚 王雨霏 姜文韬 张凌琳

    口腔疾病研究国家重点实验室 国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院牙体牙髓病科，成都610041

    龋病是在牙菌斑、宿主、食物、时间等四联因素影响下，牙体硬组织发生的慢性进行性破坏的疾病。牙菌斑是三维结构的细菌群落，包括微生物、多糖、蛋白质和DNA[1]，构成牙菌斑的微生物包括致龋菌和共生菌，其群落内部有着复杂的共生和竞争关系。其中变异链球菌(Streptococcus mutans，S.mutans)是公认的主要致龋菌之一，其毒力因子包括产酸性、耐酸性以及维持生物膜结构稳定的能力[2]。血链球菌(Streptococcus sanguinis，S. sanguinis)和格氏链球菌(Streptococcus gordonii，S.gordonii)因产碱和产生H2O2等原因拮抗S. mutans[3]，一般与龋发生率降低密切相关[4-5]。因此，抑制牙菌斑内S. mutans的生长，减少S. mutans生物量和占比，破坏生物膜的结构与形貌的完整性是降低其致龋性的有效途径。

    抗菌肽(antimicrobial peptides，AMPs)拥有快速杀菌作用和多种杀菌机制，能够有效地抑制浮游菌生长和生物膜形成，并且已经有研究[6]证实其与口腔健康密切相关。目前，已经有大量关于天然或合成AMPs对致龋菌效果的研究[7-9]。本课题组在前期自主设计并且成功合成了一种抗菌肽GH12，已经证实GH12 无明显细胞毒性，在唾液中能够保持良好的稳定性，且具有优越的抗菌性能[10-11]，抑制S.mutans的多种毒力因子，减少胞外多糖(extracellular polysaccharides，EPS) 合成，抑制生物膜形成[12]，还能清除已形成的S. mutans生物膜[10]。

    然而，这些研究仅仅关注了GH12对S.mutans的浮游菌和单菌种生物膜的作用，尚需要进一步研究GH12能否对多菌种生物膜内部的S.mutans发挥杀伤作用，并由此改变生物膜的形貌及菌种构成，使得生物膜向更易清除的方向转化。综上，本研究拟通过结晶紫染色、扫描电镜(scanning electron microscopy，SEM)和荧光原位杂交(flu‐orescent in situ hybridization，FISH)的方法探究GH12 能否改变龋相关三菌种生物膜的形貌及菌种构成，并通过选择性计数法探究GH12 能否降低S.mutans的比例。

    1 材料和方法 ......