万梓欣 郑志建 黄美畅 陈宇 姚莉洪

    口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院病理科，成都610041

    口腔白斑(oral leukoplakia，OLK)是指发生在口腔黏膜上的不能被擦掉的白色斑块，经临床和病理学检测不能诊断为其他任何疾病者。OLK属于口腔黏膜潜在恶性疾患[1]，有3%～5%的OLK可发展为口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)，其转变为OSCC的风险比正常人高50～100倍，平均癌变病程达8.2年[2-3]。因此，OLK恶变潜能的评价及早期干预对OSCC的预防有重要意义。

    由于气候、文化等自然和社会因素的影响，成都地区人群喜食辛辣食物[4]。近年来，随着人们对“饮食对健康的影响”关注度的提高，辛辣饮食在OLK癌变过程中的作用逐渐引起人们的关注。目前关于辛辣饮食在肿瘤发生发展中的作用仍有较大争议。部分研究[5]认为食用辛辣刺激性食物是导致上消化道癌变的主要诱因之一，部分研究[6]认为辛辣饮食是肿瘤发生发展的保护因素，还有研究[7]认为辛辣饮食与肿瘤发生发展之间无明显相关性。但是，关于辛辣食物与OLK癌变的相关关系目前尚无研究[8]。在OLK治疗上，要求患者清淡饮食，消除刺激性食物对口腔黏膜的刺激，提示辛辣饮食对OLK癌变可能有促进作用。因此，本研究通过检测Ki-67、Cyclin D1、P53和P16在有辛辣饮食习惯的成都地区OLK及癌变患者中的表达，分析其与临床病理参数的关系，旨在探讨分子标记物在早期预测有辛辣饮食习惯OLK患者癌变过程中的意义。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 标本来源 收集整理2016年1—12月四川大学华西口腔医院病理科存档的45例患者的OLK蜡块。实验组为有辛辣饮食习惯的OLK及癌变患者(30例)，其中OLK不伴上皮异常增生(OLK-)、OLK伴轻-中度上皮异常增生(OLK+)、OLK伴重度上皮异常增生或癌变(OLK++/OSCC)患者各10例；纳入标准：成都地区，临床和组织病理活检均诊断为口腔黏膜OLK，每周至少有3 d吃辣且持续5年以上，术前未行放化疗。对照组为无辛辣饮食习惯的OLK及癌变患者(15例)，其中OLK-组、OLK+组、OLK++/OSCC组各5例；纳入标准要求患者每月至多1 d吃辣，即无辛辣饮食习惯，其他同实验组。所有切片均由2位经验丰富的副主任医师职称以上的病理科医师重新阅片确认。

    1.1.2 试剂 鼠抗人Ki-67单克隆抗体(1∶800)、兔抗人Cyclin D1单克隆抗体(1∶100)、鼠抗人P53单克隆抗体(1∶800)、鼠抗人P16单克隆抗体(1∶200)(福州迈新生物技术开发有限公司) ......