朱健慧 郑欣 彭显 徐欣 Robert Margolskee 周学东

    1.口腔疾病研究国家重点实验室 国家口腔疾病临床研究中心四川大学华西口腔医院牙体牙髓病科，成都610041；2.Monell Chemical Senses Center，美国费城PA 19104

    哺乳动物可感知甜、酸、咸、苦、鲜五种基本味觉，味觉感知对于个体摄取营养物质、鉴别有毒有害物质有重要意义[1]。味觉异常是以味觉改变为特征的疾病，处于味觉异常状态的患者容易出现食欲减退、营养不良、情绪消极等，严重影响生活质量[2]。近日研究[3]报道新冠肺炎患者出现味觉感知障碍或味觉丧失，提示微生物对味觉感知的重要影响。味觉异常的病因尚不明确，但口腔卫生状况不佳、牙周病等口腔局部微生物因素与味觉感知的变化具有相关性[4]。

    味觉感受器中的味觉受体细胞被某些物质激活后，通过感觉神经将味觉信号传递至大脑相应区域，形成味觉感知。甜味受体属于G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors，GPCRs)C家族，为Ⅰ型味觉受体家族(taste receptor type 1，T1R)中的两种亚型T1R2和T1R3组成的异源二聚体，可被糖(葡萄糖、果糖等)，人工甜味剂(糖精、安赛蜜等)及甜味蛋白(莫奈林、神秘果素等)等甜味配体激活产生甜味信号[5]。研究[6]表明，小鼠摄取脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)后，对蔗糖的甜味敏感度显著降低，但其机制尚不明确。

    可变剪接指来源于同一基因的前体mRNA经过不同方式的剪接，形成不同的成熟mRNA，进而翻译为结构、功能不尽相同的蛋白质。可变剪接是真核生物中广泛存在的转录后调控方式，具有重要的生物学意义[7]。LPS可通过调控Toll样受体下游分子MyD88编码基因的可变剪接影响其在炎症反应中的功能[8]。T1R2前体mRNA包含6个外显子和5个内含子，可能受到可变剪接调控，影响甜味感知功能。本研究旨在探究LPS对甜味受体可变剪接的影响，从转录后调控角度揭示口腔微生物感染引起味觉感知异常的可能机制。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂和材料

    RNA提取试剂盒MiniBEST Universal RNA Extraction Kit、逆转录试剂盒PrimeScript?RT reagent Kit with gDNA Eraser、高保真DNA聚合酶Prime-STAR?Max DNA Polymerase、实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction ......