张帅 王江红 田利杰 王宝利 张娟

    1.天津医科大学口腔医院修复科，天津300070；2.天津医科大学朱宪彝纪念医院·内分泌研究所，天津300134

    颞下颌关节骨关节病(temporomandibular joint osteoarthritis，TMJOA) 作为一种退行性关节疾病，其特征是软骨成分的退变以及软骨下骨的异常改建[1]。TMJOA 的发病人群主要集中于女性，影像学表现为髁突表面磨损变平或变尖、骨赘形成、囊样变等，髁突表面软骨细胞死亡，软骨基质降解是造成TMJOA的重要原因之一[2-3]。

    由于女性易患TMJOA，雌激素在TMJOA 发生发展过程中的作用引起关注。在自然TMJOA 模型中，17β-雌二醇(17β-estradiol，E2) 的应用能有效缓解关节软骨退变，表明E2 对关节软骨存在保护作用，然而该保护作用机制尚未明确[4-5]。

    哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR) 广泛存在于各种细胞中，在细胞自噬活动中发挥重要调节作用。mTOR 通过磷酸化能够活化并能有效抑制自噬关键标志物脂质化轻链蛋白3B (lipid modified of light chain 3B，LC3-Ⅱ) 的形成，从而抑制细胞自噬。近期研究[6]表明，mTOR 信号在细胞生长增殖过程中也起到重要作用。

    雷帕霉素(rapamycin，RAPA) 是一种自噬诱导剂，也是特异性mTOR抑制剂，可以抑制mTOR的磷酸化。研究[7]表明，颞下颌关节损伤模型中的软骨退变会伴有软骨内自噬水平的降低，而RAPA的应用可以特异性提高软骨内自噬水平，提高软骨细胞抗损伤能力并延缓关节软骨的退变进程。

    本实验通过检测E2 在不同条件下对髁突软骨细胞增殖及自噬相关指标的影响，来探讨E2 影响髁突软骨细胞增殖能力的机制。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物

    6 周龄雌性SD 大鼠20 只(北京斯贝福公司)，动物使用符合我国关于动物保护管理委员会相关规定。

    1.2 主要试剂

    总RNA 快速提取试剂盒(Omega 公司，美国)，高效率逆转录试剂盒(Thermo公司，美国)，SP-9000 试剂盒(上海生工生物工程有限公司)，无酚红培养基(天津可典生物科技有限公司)，雌激素受体α (estrogen receptor alpha，ERα) 单克隆抗体(Abcam 公司，英国)，β-actin 单克隆抗体、雌激素受体β (estrogen receptor beta ......