陈娇 吕蝶 陈红利 张平

    口腔疾病研究国家重点实验室 国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院，成都 610041

    唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)是口腔颌面部最常见的涎腺上皮来源性恶性肿瘤之一，具有生长缓慢但侵袭性强，早期沿神经、血管束向远处扩展等特征；并伴有易复发、高转移的生物学特性(5年肺转移率高达50%)[1-3]。

    细胞生物学和蛋白质功能主要受蛋白激酶和蛋白磷酸酶的磷酸化和去磷酸化调节[4]。蛋白激酶D(protein kinase D，PKD)是一类新的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，由于其结构域与钙离子/钙调蛋白依赖性激酶(Ca/calmodulin-dependent protein kinases or CaM kinases，CaMK)家族的同源性高于蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)家族，目前PKD 家族已经被定义为CaMK 家族[5]。PKD 包含PKD1、PKD2 和PKD3 三个亚型。PKC 能特异性的诱导丝氨酸位点Ser744 和Ser748 的磷酸化。PKD Ser744/748 位点磷酸化后常伴随Ser916 的磷酸化，该位点的磷酸化被认为是PKD 激酶完全活化的标志[6-7]。PKD 主要介导细胞外刺激信号至胞内传递过程，近年来，其在肿瘤发生、发展中的作用受到广泛关注。

    癌症的治疗一直以来是世界性难题，抗肿瘤药物的研发也在不停的进展之中。近年来，小分子抑制剂靶向癌症作为一种新的治疗手段正在成为肿瘤治疗药物研发与研究的一个热点[8-9]。CRT0066101作为新近研发靶向PKD的小分子抑制剂，已被证实在胰腺癌、结直肠癌和转移性乳腺癌的异种移植模型中具有治疗效果，但目前在SACC 中的作用研究报道甚少[10-12]。本研究旨在观察CRT0066101 对SACC 细胞迁移能力的影响，并探讨其相关机制。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    p-PKD/PKC mu(Ser916)抗体、E-钙黏着蛋白(E-cadherin，E-cad) 抗体、锌指转录因子(Snail)抗体、β-actin 抗体(CST 公司，美国)，胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(PAN-Biotech GmbH 公司，德国)，DMEM/high 培养基(Gibco 公司，美国)，CRT0066101、MG132(APEx-Bio 公司，美国)，佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate ......