血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达

http://www.100md.com 2005年2月1日 余自强 董宁征 白 霞 祝怀平 季顺东 江 淼 阮长耿

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     摘要：目的 利用基因重组技术体外表达血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)胞外区片段。方法 采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA，构建表达载体pET-20b(+)—GPⅥ，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，经IPTG诱导表达。表达产物经NlNTAResin纯化后复性；使用Westernblot方法鉴定重组蛋白性质。结果 PCR扩增产物经测序证明与GPVI胞外区cDNA序列完全一致；酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b(+)—GPⅥ；原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量为32kd的蛋白条带，诱导产物以包涵体形式存在；Western印迹分析表明重组蛋白可与抗Penta-His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合。结论 正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白，纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性。

    关键词：血小板；血小板糖蛋白Ⅵ；胶原

    中图分类号：R331.143 文献标识码：A 文章编号：1673—0399(2005)01—0019—04

    http://www.100md.com/html/paper/1000-5749/2005/01/07.htm

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