重组ＡＩＬ—8在大肠杆菌中的表达及纯化工艺的优化
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摘要：目的 优化重组人IL-8(rhlL-8)大肠杆菌表达及纯化工艺，以便获得高纯度的重组蛋白。方法 将已构建好的表达载体转化大肠杆菌HBl01，经3—吲哚丙烯酸诱导，在发酵罐中进行表达，比较不同诱导剂浓度、温度、pH值及时间，以获得最佳表达工艺参数。离心收集菌体，超声破壁，收集包涵体和胞浆，其中包涵体经变性、复性处理，与包浆部分合并，经肝素亲和层析柱、阳离子交换柱和凝胶层析柱分离纯化，比较不同的洗脱条件，得到纯品，并对重组蛋白的纯度和生物学活性进行鉴定。结果 用大肠杆菌HBl01在发酵罐中表达rhlL-8，在30℃、pH为7.0的条件下加入50mmol/L3—吲哚丙烯酸，诱导28 h，得到约为100 mg/ml的高表达，其分泌的重组蛋白以包涵体和胞浆的形式存在，经三步层析纯化后，得到高纯度的rhlL-8(纯度>95%)，经中性粒细胞趋化实验证实，所获IL-8具有良好的趋化白细胞迁移的作用。结论 建立高效表达rhlL-8的原核表达和纯化工艺，所获的纯化IL—8具有良好的生物学活性。
关键词：白细胞介素—8；大肠杆菌；表达；纯化
中图分类号：R392—33 文献标识码：A 文章编号：1673—0399(2005)05—0780—03
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