美洛昔康对铝负荷致大鼠海马神经元损伤的保护作用Δ
空白对照,批号,1材料与方法,1动物与试药,2海马神经元原代培养,3NSE免疫细胞化学鉴定,4MTT法测定,5LDH活性测定,6SOD活性和MDA含量测定,7神经元病理形态学观察,8统计学分析,2结果,1NSE
谢灵瑶,杨俊卿,黄 砚(重庆医科大学药学院药理学教研室,重庆市 400016)环氧化酶(Cyclooxygenase,COX)是催化花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)生成系列前列腺素衍生物(Prostaglandins,PGs)的限速酶,COX可分为结构型COX-1和可诱导型COX-2。越来越多的研究[1,2]证明炎症因子COX-2在造成脑损伤过程中有着十分重要的位置,且在炎症或损伤时,COX-2在神经元上高表达。另有研究[3]表明,中枢神经系统炎症因子PGs及COX-2的表达与神经元损伤退变有密切关系,它们参与了神经退行性疾病的发病过程。美洛昔康是COX-2选择性抑制剂。本课题组前期研究[4,5]表明,美洛昔康对铝负荷所致急、慢性脑组织损伤具有明显的改善作用,但由于在体实验影响因素较多,为进一步证实美洛昔康对脑损伤的保护作用,本文采用海马神经元原代培养,在细胞水平观察美洛昔康对铝盐致神经元损伤的作用,并且初步探讨其作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物与试药
新生24 h内SD(Sprague-Dawley)乳鼠,由重庆医科大学实验动物中心提供,动物许可证号SCXK(渝)2002000。
美洛昔康(昆山龙灯瑞迪制药有限公司,批号:07050,纯度:100.5%);DMEM/F12培养基(批号:1361834)、B27培养基(批号:1290007)均由美国Gibco公司提供;特级胎牛血清(天津灏洋公司,批号:XA070621HY);多聚-L-赖氨酸(批号:AR0003)、MTT(批号:SP1090,使用时以磷酸盐缓冲液(PBS)制备成5 mg·mL-1溶液备用)均由美国Sigma公司提供;兔抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)多克隆抗体(批号:BA0535)、抗体稀释液(批号:AR1016)均由武汉博士德生物工程有限公司提供;免疫组化SP(Streptavidin-perosidase)试剂盒(批号:K86922E)、DAB(3,3′-diaminobenzidine)显色剂(批号:375230AJ)均由北京中杉生物技术有限公司提供;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(批号:20090226)、超氧化物岐化酶(SOD)试剂盒(批号:20090318)、丙二醛(MDA)试剂盒(批号:20090318)均由南京建成生物工程研究所提供;氯化钠(NaCl)、六水三氯化铝(AlCl3·6H2O)均为国产分析纯。
1.2 海马神经元原代培养
出生24 h内的乳鼠 ......
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