仇 燕(南华大学附属南华医院，衡阳市 421002)

    长春碱(Vinblastine，VBL)是一种二聚吲哚类生物碱，属于长春碱类化合物。长春碱于1958年从长春花中提取出来，1970年后被广泛应用于临床肿瘤的治疗中，具有良好的抑制多种恶性肿瘤生长的作用，用于如何杰金氏病、绒毛膜上皮癌、急性白血病、乳腺癌和口咽部癌等的治疗中[1]。有关长春碱的研究虽报道较多，但有关其在免疫学方面的研究罕见报道。固有免疫是免疫系统的第一道防护线，而巨噬细胞在固有免疫应答中起着重要的作用[2]。故笔者以巨噬细胞(RAW264.7细胞)增殖和分泌一氧化氮(NO)等细胞行为变化为靶点，研究长春碱对其的影响，以为筛选和开发新型免疫调节药提供新策略。

    1 材料

    1.1 试药

    脂多糖(LPS)、二甲基亚砜(DMSO)、MTT、碘化丙啶(PI)、抗β肌动蛋白单克隆抗体(Anti-beta-actin mAb)、抗鼠细胞周期蛋白B1单克隆抗体(Anti-mouse cyclin B1 mAb)、辣根过氧化酶标志的羊抗鼠IgG(HRP-goat Anti-mouse IgG)和长春碱(批号：V1377，纯度：≥96%)均由美国Sigma公司提供；DMEM培养基低糖(干粉)和胎牛血清均由美国Gibco-BRL公司提供；Griess检测试剂盒(美国Promega公司)；凯基Super ECL检测液(南京凯基生物科技发展有限公司)；其它试剂均为国产分析纯。

    1.2 细胞

    RAW264.7细胞系购自武汉大学典型培养物保藏中心。

    1.3 仪器

    680型酶标仪、PowerPac Basic型电泳仪(美国Bio-RAD公司)；FACSCalibur流式细胞仪(美国Becton Dickinson公司)；IX70倒置显微镜(日本Olympus公司)；2300型CO2细胞培养箱(美国Sheldon公司)；SW-CJ-IF型洁净工作台(苏州净化设备厂)；Megafuge 1.0R型低温离心机(德国Herculeus公司)。

    2 方法

    2.1 细胞培养

    取RAW264.7细胞于DMEM培养基中培养至对数生长期，用 0.25%胰酶消化液消化，离心(125 r·min-1，5 min，20℃)，调整细胞密度为每升5×108个，并接种于96孔细胞培养板，每孔定容200 μL，于37 ℃、5%CO2培养箱培养24 h。 ......