陆思静，管希周，王睿，梁志欣，刘又宁(1.辽宁医学院附属第一医院呼吸科，锦州市 11001；.解放军总医院军医进修学院，北京市 100853)

    59株大肠杆菌中整合子的研究

    陆思静1*，管希周2，王睿2，梁志欣2，刘又宁2(1.辽宁医学院附属第一医院呼吸科，锦州市 121001；2.解放军总医院军医进修学院，北京市 100853)

    目的：研究59株耐头孢西丁大肠杆菌整合子的分类、结构及其在介导耐药中的作用。方法：利用多重聚合酶链反应(PCR)方法检测整合酶基因(intI)，对其阳性菌株可变区(Int)扩增产物进行测序分析；采用微量稀释法测定22种抗生素对试验菌株的敏感性。结果：59株大肠杆菌中，45株Ⅰ类整合酶基因阳性(76%)；所携带的耐药基因盒绝大多数为aadA5和dfr 17；仅有2株携带β-内酰胺酶耐药基因盒；整合子阳性组抑菌浓度明显高于阴性组。结论：Ⅰ类整合子广泛地存在于耐头孢西丁大肠杆菌中；耐药基因盒是整合子阳性菌株对氨基糖苷类、磺胺类药物及氯霉素耐药的主要原因，但对介导β-内酰胺类耐药方面，不起主要作用。

    整合子；基因盒；细菌耐药；聚合酶链反应

    大肠杆菌是引起下呼吸道感染最常见的革兰阴性杆菌之一[1]，随着多重耐药菌株的日渐增多，治疗该菌引起的感染变得越来越困难。其耐药机制非常复杂。研究表明，整合子不仅可介导细菌耐药性群聚，导致多重耐药性的产生，而且可以在不同遗传物质和菌种间转移，引起耐药基因高效快速转移，这已经成为研究热点[2]。但国内这方面的研究鲜见。整合子由5′-和3′-保守末端及中间的可变序列组成，5′-保守末端携带编码整合酶的基因(intI)、整合酶基因重组位点(attI)和一个启动子的基因片段。中间的可变区域携带有耐药基因的基因盒[3]。现已确认至少有9种整合子，但在耐药方面起最主要作用的为第1类整合子[4，5]。以解放军总医院临床连续收集的59株大肠杆菌为对象，对其耐药情况、整合子分布及其结构特征、整合子介导的耐药机制在多重耐药性中的作用进行研究，为指导临床合理应用抗生素，控制耐药菌株在院内的传播提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 菌株

    解放军总医院微生物科从2001～2002年各种临床标本中分离得到的全部大肠杆菌719株。纸片琼脂扩散药敏试验筛选出对头孢西丁耐药菌株59株[6]。

    1.2 主要试剂与仪器

    DL15 000 DNA Marker为日本TaKaRa公司产品；pGEM-T载体、DNA聚合酶采用美国Promega公司产品；包被22种抗生素的96孔药敏板(天津金章医用新技术研究所)；DNA Thermal Cycler 2400为美国Perkin Elmer公司产品 ......