槟榔碱对人体外精子运动能力的影响Δ
时间段,1材料,1仪器,2试药,2方法与结果,1标本收集,2试液制备和精子优选,3分组与孵育,4CASA进行分析,5统计学方法,6槟榔碱对人体外精子运动能力参数影响试验结果,3讨论
高文平,杨大坚,胡四琴,邹德学,曾薇,徐彷周,郭静,袁劲松#(.北京大学深圳医院,深圳市 5806;2.汕头大学医学院,汕头市 5504;.香港理工大学深圳研究院,深圳市 5806)槟榔(Areca catechu L.)是棕榈科植物槟榔的干燥成熟种子,是一种常用中药,位居我国著名四大南药之首。槟榔嚼块是槟榔果实或果实与其它添加物混合的咀嚼物,目前全世界约有6亿人咀嚼槟榔嚼块。有研究表明,槟榔嚼块的流行与致癌、致突变、神经精神毒性、生殖毒性等有关[1]。生物碱是槟榔果实的主要活性成分,而研究槟榔碱对人精子质量影响的报道较少。本试验优选正常男性精子与不同浓度槟榔碱溶液共孵育,采用计算机辅助的精子分析系统(CASA)观察不同浓度槟榔碱溶液对人精子活率、活力、速度等指标的影响。
1 材料
1.1 仪器
CASA(北京清华同方软件股份有限公司);DK-8A型电热恒温水槽(上海精密实验设备有限公司);0412-1型MACRO精子计数板(上海蔡康光学仪器有限公司)。
1.2 试药
小牛血清白蛋白(BSA,美国Sigma公司)、Ham's F10培养液(美国Gibco公司);氢溴酸槟榔碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:111684-200401)。
2 方法与结果
2.1 标本收集
按WHO推荐的试验方法及标准[2],从本院男科门诊送检的精液标本中,收集50例正常成年男性精液。年龄22~30岁。取样方法为:禁欲3~5 d,取样前48 h禁饮酒和咖啡等对精子有影响的食物或药物,手淫法收集标本于干净的容器并及时送验。
2.2 试液制备和精子优选
2.2.1 精子优选液的制备:取10 mL Ham's F10培养液,加入BSA 35 mg,调节pH值至7.4,用0.22 μm微孔薄膜过滤除菌,备用。
2.2.2 槟榔碱溶液的制备:取槟榔碱,用精子优选液分别配制成10、50、100 μg·mL-1,调节渗透压为290 mosm·kg-1的槟榔碱溶液。
2.2.3 精子优选:按文献方法[3]加以改良。取1支10 mL一次性医用注射器,抽入2 mL空气后再抽入精子优选液2 mL,最后缓慢抽入精液1.5 mL,避免震动,使精液与优选液分界清楚,将注射器针头护嘴套上 ......
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