李最琼(南华大学附属南华医院，衡阳市 421002)

    小檗碱(Ber)又名黄连素，是一种从黄连植物中提取的苯并异喹啉类季铵型生物碱[1]。Ber可作为一种广谱抗菌药物，对多种革兰阴阳菌、真菌、霉菌、病毒、原虫和线虫等具有抑制杀灭的作用，已在临床上应用多年，常用于治疗感染性分泌性腹泄、消化性溃疡及胃炎、霉菌感染和慢性胆囊炎等，其疗效确切，但作用机制还不明确[2]。Toll样受体2(TLR2)属于模式识别受体，能识别多种病原微生物的成分，如革兰阴性和阳性菌的肽聚糖、真菌的酵母聚糖、原虫的黏蛋白和病毒的包膜糖蛋白等[3]。因此，以TLR2的细菌脂蛋白(BLP)刺激RAW264.7细胞，研究小檗碱对TLR2信号通路和炎症因子表达情况的影响，不但完善了小檗碱抗菌消炎的机制，而且可为扩大其临床应用范围提供理论依据。

    1 材料

    1.1 仪器

    680型酶标仪、PowerPac Basic电泳仪(美国Bio-Rad公司)；IX70型倒置显微镜(日本Olympus公司)；2300型CO2细胞培养箱(美国Sheldon公司)；SW-CJ-IF型洁净工作台(苏州净化设备厂)；Megafuge 1.0R型低温离心机(德国Herculeus公司)；DNA/RNA测定仪(英国Pharmarcia公司)；GBox-HR DNA/蛋白质凝胶成像系统(英国Syngene公司)。

    1.2 试药

    BLP(采用人工合成的细菌脂蛋白Pam3CSK4·3HCl，美国Alexis公司，批号：ALX-165-066-M002)；盐酸小檗碱(美国Sigma公司，批号：D046)；抗β肌动蛋白单克隆抗体(Anti-beta-actin mAb)、抗核因子κB 抑制性蛋白(IκB)磷酸化抗体、羊抗鼠IgG、酶联免疫吸附法(ELISA)干扰素-γ(IFN-γ)、干扰素-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、白介素-13(IL-13)试剂盒(美国R&D公司)；Trizol试剂、DNA marker、预染蛋白marker(美国 Invitrogen公司)；TLR2、β-actin引物(上海捷瑞生物工程有限公司)；RT-PCR试剂盒(美国Fermentas公司)；Premix Taq(大连宝生物工程有限公司)；DMEM培养基低糖(干粉)、胎牛血清(美国Gibco-BRL公司)；其余试剂均为国产分析纯 ......