王丽，宋杰，刘晓燕，何涛，段承刚

    (泸州医学院医学分子生物学实验室，泸州市 646000)

    肝癌是威胁人类生命健康的消化道肿瘤之一，世界卫生组织调查数据显示，全世界每年新发现的肝癌患者中约42.5%发生在我国，且发病率和死亡率仍在不断上升，寻找有效的治疗药物和辅助治疗手段乃当务之急。研究[1，2]发现，组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histone deacetylase inhibitor，HDACi)可纠正肿瘤细胞异常的乙酰化状态，引起细胞周期的阻断和肿瘤细胞选择性凋亡，具有潜在抗肿瘤作用。目前HDACi中氧肟酸盐类的Suberoylanilide hydroxamic acid(SAHA)、Depsipeptide(FK228)、MS-275(N，N-2-氨基苯基-氨甲基-苄基-3-氨基酸-吡啶甲基酯)和N-acetyldinaline(CI-994)等已经进入Ⅰ期和Ⅱ期临床试验，有望作为非细胞毒性新型肿瘤靶向治疗药物而应用于多种恶性肿瘤的治疗。氧肟酸类的古抑菌素A(Trichostatin A，TSA)属于一种特异性的HDACi，其在纳摩尔级浓度便具有较高活性[3]。本研究借助体外培养技术，将不同浓度的TSA作用于人肝癌HepG2细胞，测定其抑制率和凋亡率，并应用免疫细胞化学技术研究TSA对脆性组氨酸三联体(Fragile histidine triad，FHIT)蛋白和凋亡相关蛋白caspase-3、bax、bcl-2表达的影响，为进一步探讨TSA抑瘤作用机制提供试验依据。

    1 材料

    1.1 仪器

    倒置相差显微镜(日本Olympus公司)；ELX800酶标仪(美国Bio-Tek公司)；5417高速低温离心机(德国Eppendorf公司)；Tannon2500凝胶图像扫描系统(美国BIO-RAD公司)。

    1.2 细胞与试药

    人肝癌细胞株HepG2(本实验室保存)；DMEM培养基(美国Gibco公司)；新生小牛血清(成都市华星生物化学制品厂)；二甲基亚砜(DMSO)、TSA(用 DMSO制备成浓度为1 μmol·L-1的贮存液)、MTT(美国Sigma公司)；FHIT兔抗人多克隆抗体(美国Bioworld Technology公司)；β-actin兔抗人多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)；脱氧核苷酸末端转移酶介导的dTP缺口末端标记技术(TUNEL法)凋亡检测试剂盒、SABC免疫组化染色试剂盒、3 ......