金 鑫，朱 江，张煜伟，张 超(中国人民武装警察部队医学院，天津市 300162)

    类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)是慢性关节病变的全身自身免疫性疾病，它以滑膜炎为特征，表现为滑膜细胞类肿瘤样增生。笔者前期研究[1～3]表明，栀子浸膏及其单体京尼平苷能够抑制RA大鼠足肿胀并下调血清中致炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平，提示该药物可能对RA有治疗作用。京尼平苷酸(GA)是京尼平苷的衍生物，GA可抑制佐剂性关节炎(AA)大鼠继发性炎症，降低血清中TNF-α、IL-1β水平，体外可诱导AA大鼠滑膜细胞细胞凋亡[4]。本文通过观察GA对体外培养AA大鼠滑膜细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10及细胞周期的影响，进一步探讨该药物的作用机制。

    1 材料

    1.1 仪器

    TS100型倒置相差显微镜(日本Nikon公司)；3110型CO2培养箱(美国Thermo Forma公司)；SUNRISE型酶标仪(奥地利Tecan公司)；EPICS XL型流式细胞仪(美国Coulter公司)。

    1.2 试药

    京尼平苷酸(成都锦泰和医药化学技术有限公司，批号：含量(HPLC法)：≥98%)；注射用甲氨喋呤(MTX，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：07102412，规格：每支5 mg)；冻干卡介苗(北京生物制品研究所，批号：20080129，规格：每支60 mg)；弗氏不完全佐剂、Ⅰ型胶原酶、脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)、MTT(美国Sigma公司)；TNF-α、IL-1β和IL-10酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(武汉博士德公司，批号：EK0526、EK0393、EK0418)；兔抗Vimentin蛋白抗体(北京博奥森生物有限公司，批号：bs-0756R)；兔SP免疫组化试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(北京中衫金桥生物技术有限公司，批号：K86922E、290573)。

    1.3 动物

    健康Wistar大鼠，♂，体质量180～200 g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供(动物合格证号：SCXK(京)2007-0001)。

    2 方法

    2.1 模型的建立[5]

    用弗氏完全佐剂(卡介苗80℃、1 h灭活，与弗氏不完全佐剂充分乳化，含卡介苗10 g·L-1)于大鼠右后足跖皮内注射0.1 mL致炎 ......